两种新型抗血栓药物--水蛭素与水蛭肽

水蛭素是迄今发现的最强的天然凝血酶抑制剂 ,水蛭肽是模仿水蛭素与凝血酶的相互作用机制而合成的肽类化合物。本文介绍了他们的作用机理及其临床研究 ,叙述了他们与肝素相比的优越之外 ,认为水蛭素与水蛭肽是两类非常有前途的抗栓新药。     

水蛭素基因的递归PCR合成和在大肠杆菌中的表达与分泌

水蛭素是凝血酶最强的特异抑制剂，可望成为预防和治疗各种血栓疾病的有效药物。根据医用水蛭头部水蛭素（ＨＶ－２）的氨基酸序列，通过递归ＰＣＲ，合成水蛭素基因，并重组到本实验室改建的大肠杆菌分泌型表达载体ｐＩＮ－＝ｏｍｐＡ－ＨＩ中，使水蛭素基因的编码序列直接位于大肠杆菌外膜蛋白Ａ信号肽序列的下游。转化大肠杆菌ＤＨ５α，筛选出重组体，经ＰＣＲ，限制酶切图谱和序列分析，结果表明所合成的水蛭素基因与设计完全一     

水蛭素基因植物表达载体的构建

在不改变水蛭素原氨基酸序列前提前下,根椐植物基因密码子选择偏向,对水蛭素基因序列进行了改造．在设计和合成的水蛭素基因序列中添加了先导链、poly(A)尾、XbaⅠ和SacⅠ双酶切位点．将所合成序列与双元载体pBI121重组,构建成pBI121-hir植物高效表达载体．经抗性筛选法、琼脂糖凝胶电泳和测序3种方法鉴定,该载体构建成功．     

天然水蛭素的提取和纯化(简报)

水蛭素(hirudin)是存在于水蛭唾液中的一种酸性多肽类物质,是迄今为止世界上最强的凝血酶抑制剂,在治疗各种血栓性疾病及弥散性血管内凝血中均有很好的预防及治疗效果,并且没有副作用,因而它比肝素更有优越性。研究表明,水蛭素还能防止肿瘤细胞的转移,用水蛭素配合化疗和放疗,可促进肿瘤中的血流而增强疗效,因而具有宽阔的临床应用前景。     

水蛭素-RGD序列融合蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达(简报)

水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离纯化的一种多肽,分子量约为7 kD．它是天然存在的最专一有效的凝血酶抑制剂,无明显毒副作用,用量低,因此可作为抗栓药物用于治疗血栓性疾病．RGD 序列是纤维蛋白原等粘附因子上以 Arg-Gly-Asp 为核心的小肽序列,通过与活化血小板上纤维蛋白原受体 GPⅡb/ Ⅲa 结合而导致血小板聚集．因此外源 RGD 序列可通过竞争性结合该受体而阻断血小板的聚集,抑制血栓的形成．RGD 序列与水蛭素融合可获得同时具有抗凝血酶和抗血小板聚集双功能的新型抗栓剂．本文首次报道重组水蛭素 HV3与 RGD 序列融合蛋白基因克隆并在枯草芽孢杆菌中表达的结果．     

含RGD序列水蛭素嵌合抗栓剂的构建与表达

通过对水蛭素及一些含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的多肽类血小板聚集抑制剂结构与功能的分析,设计并构建了两个在水蛭素C端融合RGD序列的嵌合分子。嵌合体基因分别重组到表达载体pET-21a(+)中并转化大肠杆菌BL21(DE3)。经限制酶消化和DNA序列分析,证明两种重组质粒与设计完全一致。由于RGD-水蛭素嵌合基因上游连接了金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)的信号肽序列,在IPTG诱导下两种嵌合分子都获得了分泌表达,表达产物主要集中在细胞周质空间。通过离子交换层析和凝胶过滤层分别对两种嵌合体蛋白进行纯化,纯化产物在Tricine-SDS-PAGE中都显示为单一条带。活性分析结果表明两种嵌合体蛋白在保留水蛭素抗凝血酶活力的同时,还呈现抗血小板聚集活性。     

珠海华蓝水生物养殖有限公司——水蛭人工养殖基地

水蛭又称蚂蟥，是名贵的中药材。我国医学名著《神农本草经》和《本草纲目》中都有记载。其整体入药，具有行瘀消肿、消炎解毒、活血通络之功效。水蛭唾液中含有一种凝血酶抑制剂——水蛭素，对心脑血管类疾病的神奇疗效已引起了医学界的强烈反响。现代医学临床上用于治疗高血压、多发性脑血栓、心肌梗塞、血栓静脉炎等病症。     

新型重组双功能水蛭素构象的核磁共振研究

在核磁共振仪上进行新型重组双功能水蛭素（bifunctional-hirudin,BFH)构象的核磁共振研究，通过它在不同介质中，脉冲梯度场抑制水峰的质子二维TOCSY核磁共振（NMR）实验，对BFG的部分谱线进行了归属。     

药用水蛭养殖技术的研究和产业化开发--访珠海华蓝水生物养殖有限公司

珠海华蓝水生物养殖有限公司是专门从事药用水蛭-宽体金线蛭（以下简称水蛭)养殖技术的研究和产业化开发的科技型生物养殖企业。目前公司建有100亩的水蛭种苗繁育、技术培训和产品研发基地。而且在广东的梅州、顺德、茂名等地建有多个水蛭养殖示范基地。     

水蛭的研究概况及展望

系统总结了近年来对水蛭的化学、药理、临床及毒性的研究概况 ,并展望了水蛭未来的发展前景     

水蛭地龙注射液合大黄粉治疗慢性肾衰的临床观察

通过60例患者在常规治疗基础上加用水蛭地龙注射液的治疗，结果表明治疗纽优于对照组。结论：水蛭地龙注射液与大黄粉合用，即加强了尿毒物质从肠道排出，抑制了肾小管萎缩和纤维组织增生，明显改善了患者慢性肾衰竭症状，延迟了进入透析时间。     

水蛭在骨伤科等方面的应用

本文简述了水蛭在骨伤科等方面的应用     

双功能促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV)的构建及功能分析

采用分子克隆方法获得5拷贝口服长效促胰岛素多肽(rolGLP-1)和水蛭素(rHV)融合基因促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV),并将该基因克隆至pET22b(+)表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),实现了高效表达.表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定后用Ni-NTA亲和层析柱纯化,得到高纯度的5rolGLP-HV.用STZ诱导Ⅱ型糖尿病小鼠和血栓模型鼠进行药物功能分析,结果表明,5rolGLP-HV有较好的降糖和抗血栓效果.     

水蛭素-RGD序列融合蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达

水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离纯化的一种多肽,分子量约为7 kD.它是天然存在的最专一有效的凝血酶抑制剂,无明显毒副作用,用量低,因此可作为抗栓药物用于治疗血栓性疾病[1～2].RGD序列是纤维蛋白原等粘附因子上以Arg-Gly-Asp为核心的小肽序列[3],通过与活化血小板上纤维蛋白原受体GPⅡb/Ⅲa结合而导致血小板聚集.因此外源RGD序列可通过竞争性结合该受体而阻断血小板的聚集,抑制血栓的形成[4].RGD序列与水蛭素融合可获得同时具有抗凝血酶和抗血小板聚集双功能的新型抗栓剂.本文首次报道重组水蛭素HV3与RGD序列融合蛋白基因克隆并在枯草芽孢杆菌中表达的结果.     

安舒克栓酶和水蛭素融合基因在枯草杆菌中的表达(简报)

安舒克栓酶(Antithromboase,AT)是本实验室从枯草杆菌N18中分离得到的具有强烈水解纤维蛋白活性的蛋白酶.研究表明,该酶具有直接纤溶和纤溶酶原激活剂的双重作用,且有较强的纤维蛋白亲和性,是极具开发价值的溶栓药物.来源于医用水蛭的水蛭素(hirudin,Hir)是凝血酶的最强有力的天然抑制剂,是极具优势的抗凝药物.但仍各有不足:安舒克栓酶只有溶栓功能,不能抗栓,不能解决血栓治疗中再栓塞的问题;水蛭素只有抗凝作用,不具溶栓功能.如果将这两种从不同途径治疗血栓的药物.通过融合     

双功能促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV)的构建及功能分析

采用分子克隆方法获得5拷贝口服长效促胰岛素多肽（rolGLP-1）和水蛭素（rHV）融合基因促胰岛素水蛭素（5rolGLP-HV）, 并将该基因克隆至pET22b(+)表达载体上, 转化大肠杆菌BL21（DE3）, 实现了高效表达. 表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定后用Ni-NTA]亲和层析柱纯化, 得到高纯度的5rolGLP-HV. 用STZ诱导Ⅱ型糖尿病小鼠和血栓模型鼠进行药物功能分析, 结果表明, 5rolGLP-HV有较好的降糖和抗血栓效果.     

大黄蛰虫丸中水蛭薄层层析鉴别

目的：大黄蛰虫丸中的水蛭进行薄层层析（TLC分析）。方法：采用薄层层析法。结果：在展开系统中,水蛭中所含的有效成分能分离,并得到清晰、特异性的斑点。结论：该法为大黄蛰虫丸的定性鉴别和质量标准提供了依据。     

水蛭的酶解及其产物抗凝血活性评价

以水蛭为原料,研究不同酶解因素(酶种类、酶用量、酶解时间、pH值、酶解温度、底物浓度)对水蛭酶解产物抗凝血活性的影响规律,优化水蛭的酶解技术参数,并对酶解产物进行活性评价;研究结果表明,优化后的酶解技术条件为,适宜的水解酶为胰蛋白酶,酶用量7000 U/g,酶解时间7 h,酶解pH 8.3,酶解温度50℃,底物浓度14%(w/w)。在该条件下得到的酶解产物抗凝血酶活性最高,达到640 U/g。     

新型抗凝血元素——“水蛭素”的静脉留置针设计

本设计的＂静脉留置针＂,改变了目前医疗领域所普遍使用的钢针置留患者静脉血管内的＂静脉留置针＂传统结构,降低患者痛苦程度。特别是选用新型血液抗凝生物元素——＂水蛭素＂作为封管元素,弥补了生理盐水和肝素钠稀释液封管所带来的不足和局限性,提高了患者血液检测的准确。     

水蛭、地龙仓储变质的原因分析

进行基础措施养护并定期熏蒸，可有效防止水蛭、地龙在仓储过程中变质，保证药材质量。