对虾白斑病毒PCR反应体系的改进

采用 TN匀浆 ,蛋白酶 K、DS消化、裂解 ,煮沸的方法 ,从感染白斑病毒的养殖对虾中提取 DNA作模板 ,在模板和扩增缓冲液用量恒定下 ,改变 PCR反应体系的 d NTP、引物和 Taq酶用量 ,进行 PCR扩增 ,使用琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行检测。结果表明 ,d NTP用量在 1 2 5～ 1 87μM· L- 1、引物用量在 0 .6 μM·L- 1 、Taq酶用量达到 0 .5 u及以上时 ,扩增条带荧光很强 ,而使用产品提供商建议用量 ,PCR可现特异性扩增 ,但不是最佳的扩增     

产物变性胶纯化实现连续PCR的多轮扩增

产物弥散成片是PCR操作中一种比较常见的异常现象,在连续PCR实验中会导致扩增的最终失败.这种异常产生的内在机制是扩增过程中非全长部分链的合成、积累及其对后续扩增的干扰.缓解这种PCR扩增异常现象的途径包括抑制非全长链的合成,以及在重复扩增之前去除模板中的非全长链成分.本文显示通过碱变性琼脂糖电泳然后割胶纯化获得下一轮扩增模板的方式能够有效地避免连续扩增中产物弥散成片的异常扩增.为有效地进行重复PCR扩增提供了一个新的途径.结果进一步证实了正常PCR扩增中非全长链产生的不可避免及其对新生链合成的干扰效应.     

爱玉ISSR反应体系的建立与优化

通过单因子试验和正交设计,对影响爱玉ISSR-PCR扩增效果的因素,如模板DNA用量、Taq酶用量、dNTPs浓度、引物浓度、延伸时间和循环次数等指标进行优化.实验确立了可用于爱玉ISSR-PCR分析最适宜的反应体系：20 μL反应体积中含1 ng模板DNA、1.0 U Taq酶、0.4 μmol/L引物和0.18 mmol/L dNTPs;PCR扩增程序为94 ℃预变性4 min;94 ℃变性45 s,53 ℃退火45 s,72 ℃延伸2.5 min,共35个循环;72 ℃延伸7min,4 ℃保存.应用该体系对14份爱玉种质进行扩增,证实了该体系的适用性和稳定性.     

干用辣椒RAPD—PCR反应体系正交优化的研究

以干用辣椒幼苗为材料,研究了干用辣椒RAPD分析过程中的Taq酶、Mg^2＋,dNTPs、引物、模板DNA浓度、退火温度等影响因素,建立适合干用辣椒RAPD反应的PCR体系,即25μL反应体系中含有解体Taq酶1．5U、Mg^2＋2．5mmol／L,dNTPs0．6mmol／L、引物0．8μmol／L、模板DNA60ng．扩增程序为：94℃预变性4min;94℃变性1min,37℃退火1min,72％延伸1．5min,40个循环;最后72℃副延伸5min．     

SDS一步法制备PCR模板

为了简化PCR模板DNA的制备,选取4种实验材料,采用SDS一步法制备PCR模板.经PCR扩增,获得同常规方法制备的模板相近的实验结果.实现了"一管一步"制备模板DNA,从而开辟了一种快速、简易、低成本的PCR模板制备方法.     

一种快速的重组农杆菌PCR鉴定方法

建立一种快速的重组农杆菌PCR扩增鉴定方法,采用煮沸法处理重组农杆菌,使农杆菌高温裂解,释放质粒DNA,直接进行PCR扩增反应,检测目的基因片段.结果表明,重组质粒PCR扩增效果较好,目标条带较为明显.通过煮沸重组农杆菌,进行PCR扩增反应鉴定质粒DNA,不仅实验操作简单安全,缩短实验时间,并且避免了酚、氯仿试剂在提取质粒DNA过程中的残留对后续分子鉴定质量的影响.     

藜ISSR-PCR反应体系的优化

采用TaKaRa的PCR反应系统,以从藜(Chenopodium album L)幼叶中提取纯化后的总DNA为模板,进行UBC 859号引物的ISSR-PCR扩增实验,分别测试了镁离子、模板DNA和Taq DNA聚合酶含量对反应结果的影响,通过各因子的浓度梯度组合实验,确定了在25 mL体积的PCR反应中:酶配套缓冲液2.5μL,dNTPs0.2μmmol/L,引物0.2 mmol/L,Mg2+1.5 mmol/L,模板含量为40 ng,Taq DNA聚合酶为1.5 U是藜最佳的ISSR-PCR反应体系。     

西葫芦SRAP—PCR退火温度的优化及遗传多样性分析

以西葫芦为试材,利用梯度PCR技术,对SRAP-PCR过程中的两步退火温度进行了试验研究。结果表明：通过对第一步前5轮循环的退火温度梯度37-50℃的试验,其退火温度可提高到41℃;对第二步后30轮循环的退火温度梯度50-60℃的实验,其退火温度可提高到52℃。应用该程序在29个西葫芦自交系间进行扩增,均获得了良好的结果,并对29个自交系进行了遗传多样性分析。     

荒漠草原土壤微生物16SrDNA扩增反应条件的优化

以荒漠草原土壤微生物总DNA为材料,分析模板DNA量、Mg2+、引物和dNTP的浓度对16SrDNA-PCR扩增结果的影响,经系统的优化实验建立了土壤微生物PCR反应体系: 25μL体系中含0.1mmol/L dNTP、2.5mmol/L MgCl2、1U Taq酶、0.4μmol/L引物和4ng的DNA模板.     

水稻SRAP-PCR体系的建立与优化

对影响水稻SRAP-PCR扩增结果的模板质量浓度、dNTP Mixture浓度、Mg2+浓度以及引物、反应程序进行了探索,获得在使用大连宝生物Taq酶时能够稳定扩增水稻基因组的SRAP-PCR体系:在25μL体系中,合适的模板DNA质量浓度为0.8~1.2 ng/μL,Mg2+浓度为2~3 mmol/L,dNTP浓度为0.15~0.20mmol/L,按照Li和Quiros设计的程序或按照“94℃预变性5 min;94℃变性1 min,35℃复性1 min,72℃延伸1min,35循环,最后72℃延伸10 min,4℃保存“的程序进行扩增可以得到较为满意的结果.Li和Quiros设计的30对引物均能用于水稻SRAP-PCR.     

Mechanism of the interaction between Au nanoparticles and polymerase in nanoparticle PCR

Nanoparticle PCR is a novel method to optimize DNA amplification. It performs well in improving specificity, enhancing sensitivity and speed. Several mechanisms were proposed in previous studies: one was based on the interaction between gold nanoparticles (AuNPs) and DNA while the other was attributed to the heat transfer property of AuNPs. In this paper, we propose that the interaction between AuNPs and DNA polymerase can significantly influence PCR. First, the addition of DNA polymerase can eliminate the inhibitory effects of excess AuNPs. Second, the addition of AuNPs will increase yield of the desired PCR product and make the optimum concentration of DNA polymerase move to higher value. Third, while excess polymerase might inhibit amplification efficiency, AuNPs can reverse this process and the yield of PCR amplification. Based on these results we propose a possible mechanism that AuNPs might modulate the activity of polymerase and improve PCR amplification.     

不同分子量PVP对PCR扩增反应效率的影响

以人为设计的110bp单链DNA为模板,研究不同分子量聚乙烯基吡咯烷酮(Polyvinyl-pyrrolidone,PVP)对聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的影响。实验结果表明:0.5%的PVP K-30、PVP 8000、PVP 58000和PVP 630000均可显著提高PCR效率,并且这4种化合物提高PCR效率的能力,依次为PVP 630000>PVP 58000>PVP K-30和PVP 8000;然而,在相同浓度时,PVP K-40却显著抑制PCR扩增反应;另外,溶解曲线的实验结果显示,0.5%PVP 630000可显著降低PCR产物的Tm值,表明PVP 630000可通过与DNA相互作用,降低DNA结构稳定性,使得模板更易在PCR的变性阶段解链,最终提高PCR效率。上述研究结果表明,不同分子量的PVP对PCR扩增效率的影响不同,与其分子量大小密切相关。     

牛肉及其制品中肉类掺假的荧光PCR鉴别体系优化

根据可能用于牛肉及其制品掺假的肉类原料(猪肉、鸡肉和鸭肉),设计了4对引物和探针.经过测试其具有良好的特异性后,对影响各自聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增的5个影响因素包括Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶活、dNTPs浓度、引物和探针浓度以及模板DNA用量等进行了优化,确定了最佳的PCR扩增体系.同时,根据优化后的结果,对特异性进行进一步的测试,并使用建立的优化荧光PCR鉴别体系对混合样品和市售样品进行检测,确定整体检出限为0.1%(质量分数),并证明该鉴别体系的实际应用价值.     

小麦族拟鹅观草属Adh基因PCR扩增条件优化

拟开发适用于小麦族拟鹅观草属植物系统发育研究的低拷贝核基因,即Adh基因.通过探索模板DNA、Mg2+、dNTP和引物的浓度,以及退火温度等因素对Adh基因扩增的影响,建立最优PCR体系.在25 μL最优 PCR 反应体系中包括如下成分:2.5 μL 10 × PCR 缓冲液,0.6 μL模板DNA(约15 ng),1.5 mmol Mg2+,0.15 mmol dNTP 混合液,0.12 μmol 正向和反向引物,0.75 U Ex Taq 酶;退火温度为55℃.优化后的体系得到清晰目的条带,可用于后续研究.     

重组TgoDNA聚合酶的特性

检测了重组Tgo酶的扩增性能、 耐热性以及长距离PCR能力， 结果表明, 该重组酶扩增性能与Taq酶相当； 其耐热性极强， 在 95 ℃ 40 min， 仍具有很强的聚合活性； 利用重组酶在常规PCR条件下， 成功扩增了5.3　kb的拟南芥Timeless基因片段.     

半随机单引物PCR扩增产物的特异性研究

以Ｍ１３ｍｐ１９为模板,寡核苷酸“１２２４”为引物,进行半随机单引物ＰＣＲ扩增;分析其扩增产物的限制性内切酶酶切图谱,推定它们分别在Ｍ１３ｍｐ１９序列中的确切位置;证实引物“１２２４”的３端与模板Ｍ１３ｍｐ１９负链的互补结合,至少需有连续的４上个核苷酸,才能产生单引物ＰＣＲ扩增的模板分子,进行有效的ＰＣＲ扩增,并由此决定了扩增产物中各ＤＮＡ片段的大小及其在模板ＤＮＡ序列中的特定位置。     

一种快速制备毕赤酵母表达系统P CR鉴定模板DNA的方法

文章研究了简便高效获取毕赤酵母表达系统PCR鉴定模板DNA的提取方法,采用酶消化和物理冻熔结合的方法,提取的酵母基因组DNA直接PCR扩增检测质量。结果表明,该方法提取酵母基因组DNA具有质量高、成本低、耗时短、操作简单等优点。     

豌豆豆球蛋白（leguminA）基因的PCR扩增与鉴定

豆类的贮存蛋白是人类的植物蛋白主要来源之一,稻米平均蛋白质含量只有8％,而且人类必需的赖氨酸含量较少。如果将较富赖氨酸的豆类贮存蛋白基因转移到水稻中,提高稻米的蛋白质和赖氨酸等氨基酸的含量,是改善米质的重要途径之一。 Sun首先从法国菜豆中分离出菜豆贮存蛋白基因(Gl),随后,Lycett分析了豌豆主要     

A new method for preparation of template DNA for PCR from special plant materials

A simple method for preparation of template DNA suitable for PCR amplification from herbarium sampies and plant tissues rich in byproducts, e.g. polysaccharides, tannins, polyphenolic, and terpenoids compounds, is described. The total DNA from regular extraction procedure is absorbed by a small amount of glass powder and the final precipitation of glass powder is used directly as a template for PCR. Taking six plant taxa, including the herbarium specimens of Lythraceae collected from Namibia in 1957 and the silicon-dried leaf tissue from mangrove plants (Rhizophoraceae and Combretaceae) rich in by-products as exampies, the PCR products, including nrDNA ITS regions and cpDNA rbcL gene, amplified following the regular and new methods respectively are compared. Our method provides a simple, rapid and economic approach to purify and prepare template DNA for PCR from special plant materials.``