小麦体细胞胚发生中蛋白质组分和过氧化物酶同工酶的变化

用PAGE及薄层找扫描方法分析了小麦体细胞胚发生和发育的不同阶段蛋白质组分和过氧化物酶酶谱的变化。胚性愈伤组织,从球形胚、梨形胚,盾片胚到成熟胚不同发育时期蛋白质电泳图谱相似,与对照(非胚性愈伤组织)明显不同。前者有18KD,49KD,78KD的蛋白质组分,其含量随发育进程而上升。对照则无这些蛋白质组分或含量很低,但含有特异的14KD蛋白质。胚性愈伤组织和体细胞胚的不同发育时期过氧化物酶同工酶酶谱极其相似,都具有C_2、C_6、C_93条特异酶带,但活性有差异。对照不存在这3条酶带。再生苗的蛋白质电泳图谱和过氧化物酶同工酶酶谱介于胚性和非胚性组织之间。     

刺槐不同愈伤组织的酯酶和过氧化物酶同工酶的差异分析

本研究以刺槐体细胞分化、发育过程中采用的垂直平板聚丙烯酰胺电泳方法分析了不同类型的愈伤组织之间表现出的多态性,结果表明,酯酶同工酶和过氧化物同工酶可用来区分刺槐胚性与非胚性愈伤组织及绿色愈伤组织.     

小麦体细胞胚胎发生的细胞组织学研究

以小麦的幼穗为外植体，接种于Ｎ６Ｂ５ＭｓＩ培养基上，３０ｄ后可形成大量愈伤组织．该愈伤组织继代１次后即产生淡黄色颗粒状的胚性愈伤组织和白色致密状的非胚性愈伤组织．将此两种愈伤组织分别转入Ｎ６Ｂ５ＭｓⅡ培养基上，２５ｄ后胚性愈伤组织分化形成大量体细胞胚．本实验从外植体接种后的０～２５ｄ及胚性愈伤组织转入Ｎ６Ｂ５ＭｓⅡ培养基后的０～２６ｄ各分期取样固定，切片观察表明：小麦的幼穗诱导体细胞胚亦为间接发生，且多为外起源．但体细胞胚的发生既有来自于单个胚性细胞的，也有可能来自于多个胚性细胞或分生细胞团，经细胞分裂和分化发育而形成体细胞胚     

外源激素对防风体细胞胚发生和发育的影响

目的探讨生长素和细胞分裂素对防风体细胞胚发生和发育过程的影响。方法组织培养和石蜡切片。结果0．5mg／L2，4-D是诱导胚性愈伤组织最适宜的生长素浓度，0．5mg／LNAA在胚性愈伤组织的长期继代培养中替代0．5mg／L2，4-D可减少畸形胚的发生，NAA浓度降至0．2mg／L时促进体细胞胚的发生和分化；生长素加一定比例的细胞分裂素(6-BA或KT)可有效促进体细胞胚的发生；通过逐步降低生长素和细胞分裂素的浓度，可促进体细胞胚的分化和生长；体细胞胚在无附加激素或附加激素浓度分别低于0．2mg／LNAA和0．5mg／L6-BA的MS培养基上，均能发育成完整的植株。结论一定浓度的生长素是诱导防风胚性愈伤组织的关键因素，细胞分裂素在体细胞胚的发生和发育过程中起协同作用。     

杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生的扫描电镜观察

利用电子扫描显微镜(SEM)对杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生发育途径进行观察研究。结果表明,非胚性愈伤组织和胚性愈伤组织在表面结构上存在着明显的差异。胚性愈伤组织细胞体积较小,大小均一,多以细胞团形式存在,呈球形;非胚性愈伤组织细胞体积较大,不易成团,细胞之间孔隙较多。胚性细胞迅速增殖,其中一些细胞形成体胚的原始细胞,依次经历球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚发育成完整植株,在体胚发育过程当中保持较好的同步性和独立性。杂交鹅掌楸组织培养产生的胚状体具有明显的两极性和相对的独立性,体细胞胚尤其是成熟体胚与愈伤组织结合较松,易自行脱落。     

影响宁夏枸杞愈伤组织体细胞胚发生的因素

对宁夏枸杞愈伤组织体细胞胚发生的影响因素进行分析,结果表明,宁夏枸杞根外植体的年龄及其生理状态能影响胚性愈伤组织的形成和体细胞胚发生;4℃低温处理两周能明显促进愈伤组织形成体细胞胚,同时也能增加愈伤组织内源多胺的含量;添加Ag+有利于愈伤组织的体细胞胚发生,适当增加Ca2+浓度也有利于愈伤组织的生长及其体细胞胚发生;Eu3+的添加能明显促进愈伤组织生长,而低浓度的Ce2+、Eu3+作用有利于愈伤组织体细胞胚发生.     

宁夏枸杞愈伤组织器官发生和体细胞胚发生过程中过氧化物酶和酸性磷酸酶同工酶的研究

利用已建立的宁夏枸杞（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ Ｌ．）叶愈伤组织器官发生和体细胞胚发生体系,比较研究了两条离体再生途径早期阶段愈伤组织的生长特性、过氧化物酶（ＰＯＤ）和酸性磷酸酶同工酶的活性及酶谱的变化。结果表明：（１）与继代愈伤组织的“Ｓ”形生长曲线不同,器官发生和体细胞胚发生过程的愈伤组织生长延迟期不明显,且第３ｄ后一直处于指数生长期,培养后期器官发生的愈伤组织生长速率快于体细胞胚发生;     

小麦体细胞胚胎发生过程的研究

以小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ）幼胚愈伤组织为材料，研究了小麦的体细胞胚胎发生过程．切片观察表明：小麦的胚状体发生有两种方式，表面发生和内部发生．胚状体来源于愈伤组织中的单个原始胚性细胞．胚状体的发育经历了单个胚性细胞、胚性细胞团、球形胚、心形胚、成熟胚阶段．木实验支持胚状体单细胞起源的学说．     

簇毛麦（Haynaldia Villosa）的原生质体培养

簇毛麦的幼胚在含有９μｍｏｌ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＢ固体培养基上诱导产生愈伤组织，在相同的培养基上继代培养两个月后出现淡黄色的致密瘤状愈伤组织．在继代培养过程中，愈伤组织的分化能力丧失较快．继代培养一年左右，改变培养条件，可得到颗粒状及粉粒状愈伤组织．分别用这两种类型的愈伤组织建立悬浮培养细胞系．愈伤组织的形态结构与悬浮系的建立及原生质体培养密切相关．来源于颗粒悬浮系的细胞团块产生的原生质体分裂后可产生体细胞胚，而用粉粒悬浮系分离的原生质体不能持续分裂．     

番木瓜体细胞胚发生及发育的影响因素

研究了影响番木瓜（Ｃａｒｉｃａｐａｐａｙａ）体细胞胚发生、发育的一些因素．结果表明：①番木瓜无菌小苗幼根在附加ＮＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．５ｍｇ／Ｌ的改良ＭＳ培养基上可诱导出大量具良好胚性潜能的愈伤组织；②愈伤组织在附加ＮＡＡ０．２５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．２５ｍｇ／Ｌ的改良ＭＳ培养基上可连续继代并得到胚性化；③在所试验的激素种类中，ＫＴ是适于体细胞胚的发育，最适浓度为０．５ｍｇ／Ｌ；④０．１％～０．３％的活性炭有利于体胚的发生、发育；⑤体细胞胚在固体培养基上完成球形胚期前的发育，在液体培养液中完成球形胚期后的发育可提高成熟体胚的产量和质量     

水稻悬浮体细胞胚胎发生及其特异蛋白

以水稻优良品种吉农大８号成熟种子为实验材料,建立了悬浮体细胞胚胎发生体系,并获得再生植株,对其发生过程中特异蛋白的变化,以及诱导中胚性与非胚性愈伤组织的差异等问题进行了探讨,为将来深入研究体细胞胚胎发生机理奠定了基础,实验结果表明,不同培养偌上诱导的胚性愈伤组织的发生频率是不同的,基本培养基ＮＭＢ诱导形成的愈伤组织在适当激素浓度下,可由悬浮培养产生体细胞胚,转移到固体培养基上后,得到再生植株,对这一过程进行的组织学观察证实该形态发生途径是单细胞起源的体细胞胚胎发生,利用ＳＤＳ－聚合烯酰胺凝胶电泳比较体细胞胚胎发生中不同时期可溶性蛋白组分的差异,发现相对分子质量为５９０００的蛋白组分存在于分化初期的球形胚中,相对分子质量为５６０００的蛋白组分仅在早期成熟胚中出现;在分化出幼叶的晚期成熟胚中具有相对分子质量为３２０     

石刁柏三种不同类型愈伤组织扫描电镜观察

以石刁柏嫩茎为外植体诱导初始愈伤组织,以初始愈伤组织诱导胚性和非胚性愈伤组织,对3种不同类型愈伤组织进行扫描电镜观察,结果表明,3种不同类型愈伤组织在形态和结构上存在着较大的差别.     

农杆菌介导的胆碱脱氢酶基因(betA)转化小麦及影响转化效率的因素

用LBA4404／pCDH，Agl 1／pUNN2和Ag;P(无质粒)3种菌株分别转化小麦品种济南177、99P、核生3号幼胚诱导的愈伤组织以及济南177的幼胚．其中以胚性愈伤组织为外植体，获得了转基因植株．PCR和PCR-Southem分析证实转化植株中包含了外源基因．通过染色体分析，发现胚性愈伤组织在农杆菌LBA4404侵染后形成的染色体削减比经Agl1侵染和未经感染的对照形成的染色体削减程度更大，甚至发现较多的染色体断片．分析了农杆菌菌株，材料的基因型，外植体类型，培养时间和温度以及筛选的时间和周期对于转化效率的影响．     

玉米茎尖培养研究(Ⅱ)--体细胞胚胎发生的组织细胞学研究

以玉米茎尖分生组织为外植体，在离体培养条件下诱导体细胞胚胎(胚状体)发生。组织细胞学观察表明，玉米茎尖分生组织在离体培养条件下可直接产生胚性愈伤组织，后者在继代培养中发生胚状体。多数胚状体起源于愈伤组织的表层细胞和表层之下的几层细胞，少数产生于愈伤组织的较深层。胚状体发生于单细胞，发育过程与合子胚大致相似。多数胚状体发育正常，具有一个芽端和一个胚根端。少数胚状体形成具多个芽端而共用一个胚根端的次生连体胚。胚状体发生不同步。胚状体只有在分化培养基上才能发育成熟。     

日本落叶松胚性愈伤组织蛋白组分双向电泳分析

对日本落叶松(Larixleptolepis)胚性愈伤组织进行了组成特点和蛋白质组分双向电泳的研究.研究表明,胚性愈伤组织是由不同发育阶段的早期胚组成的细胞团,早期胚主要由长的胚柄细胞及其顶端的胚头细胞组成,而后者又具不同的分裂相.以三氯乙酸/丙酮法提取胚性组织的总蛋白,通过双向凝胶电泳获得了完整的全蛋白质图谱.运用图像分析软件(I mage Master2D)对电泳图谱分析表明:在凝胶上展现出475个蛋白质组分,并进一步确定每个蛋白质相应的分子质量、等电点和相对含量.从本研究所获得的具高分辨率日本落叶松胚性愈伤组织蛋白质图谱,将为今后与愈伤组织的分化能力相关的蛋白质的检测、分离和基因克隆,以及胚性能力相关蛋白标准化的制定等提供参考.     

杂交鹅掌楸体胚发生过程的起源及发育过程

以杂交鹅掌楸体细胞胚为材料,利用细胞学技术研究杂交鹅掌楸体细胞胚的起源及发育过程。结果表明:以杂交鹅掌楸未成熟胚为材料,比较容易形成胚性愈伤组织,胚性愈伤组织细胞结构致密、胚性细胞小、直径相等、细胞质浓厚,细胞内大量积累淀粉等物质,胚性愈伤组织表面的一些核质比大的单细胞发育成单细胞原胚,单细胞原胚有厚壁包围,呈生理隔离状态,后经过细胞分裂建立极性,细胞分裂经过球形胚、心形胚、鱼雷胚最后发育有茎段、根端及V形维管束系统的成熟子叶胚。     

Establishment of a genetic transformation system for maize inbred P9-10

It was found that the supplement of 10 -4 mol/L AgNO3 in N6 medium enhanced the induction of type Ⅰ embryogenic calli from immature embryos of maize inbred P9-10. After high-osmotic treatment, the induced calli was taken as transformation recipient to be bombarded with plasmid pMG6 carrying synthetic Bt gene by PDS-1000/He genegun. A total of 14 resistant calli were obtained after screening subsequently on the mediums with gradually increasing selective pressure. 10 plants were regenerated from the resistant calli on 3 different induction media, and 8 out of the 10 regenerated plants were confirmed to be integrated with Bt gene by PCR and Southern blotting analysis. Results of ELISA showed that the Bt-protein content in the leaves of the transgenic plants varied between 20-200 ng/g fresh weight.     

用基因枪法转bar基因以培育抗除草剂的直播稻

用基因枪法将 p CB1 质粒 (含 bar基因和 cecropin B基因 )导入到三种有应用前景的直播稻品种中 ,受体材料为来源于水稻未成熟胚的胚性愈伤组织和来源于成熟胚的悬浮细胞系 .当代转化植株显示出很强的对除草剂 Basta的抗性 ,Southern-blot分析显示 :两个外源基因共整合到转化植株基因组中 ;子一代植株中仍含有外源基因 ;来源于同一块愈伤组织的转化植株的整合模式可能是相似的 ,也可能完全不同 .     

麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western-blot鉴定

麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western blot鉴定戎　芳1,2,王胜华1,赵小光1,郭　亮1,魏　琴1,唐　琳1,徐　莺1,陈　放1, (1.四川大学生命科学学院,成都610064;2.安徽大学生命科学学院,合肥230039)麻疯树(JatrophacurcasL.)系大戟科麻疯树属植物,耐干旱贫瘠,抗病虫能力强[1,2],主要生长在热带和亚热带地区,在我国西南地区有丰富的资源.麻疯树种子对整体动物,如小白鼠[3]、羊[4]及人,特别是幼儿[5]表现出一定的毒性,且具有致死作用.麻疯树种子含毒成分主要是种子毒蛋白(curcin),该蛋白是一种单链核糖体失活蛋白,具抗癌活性[6],是一种具开…