芪丑汤拆方对ERS大鼠RIF分子伴侣作用的影响

研究芪丑汤拆方对肾间质纤维化大鼠肾组织内质网应激分子伴侣作用的机理.通过单侧输尿管梗阻建立大鼠肾间质纤维化的动物模型.将大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组、芪丑汤全方组、温补脾肾组、泄浊化瘀组.分别于造模后第7天、第14天处死大鼠,收集大鼠血清测定肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);摘取左侧肾脏,称肾脏重量比较分析,观察肾脏水肿程度;采用HE染色评定肾小管损伤指数,及肾间质纤维化程度;采用Western Blot免疫印迹法检测各实验组内质网分子伴侣GRP78、GRP94蛋白表达水平.结果表明,术后第7、14天,各治疗组与模型组比较,Scr、BUN的水平均明显降低(P0.01,P0.05);第7天芪丑汤全方组与依那普利组比较Scr水平有差异(P0.05);第14天芪丑汤全方组与依那普利组比较,降低Scr、BUN作用明显(P0.05);术后第7、14天,除14天的温补脾肾组外各治疗组与模型组相比,均能减小肾重(P0.01,P0.05);芪丑汤全方组与依那普利组比较能减轻肾重(P0.05);术后第7天芪丑汤全方组与模型组相比,能显著减轻肾小管损伤(P0.05);14天芪丑汤全方组与依那普利组比较,肾小管损伤作用有差异(P0.05);术后第14天,芪丑汤全方组和泄浊化瘀组与模型组比较GRP78、GRP94的蛋白表达有显著差异(P0.01),与依那普利组比较,芪丑汤全方组能显著抑制GRP78、GRP94的表达(P0.01).芪丑汤全方组能够保护单侧输尿管梗阻大鼠的肾功能;减轻肾脏肾盂积水;降低肾小管损伤指数;减少GRP78、GRP94的蛋白表达从而干扰内质网应激过程介导的细胞凋亡通路,阻碍细胞凋亡沉积引起的肾间质纤维化.各治疗组14天的作用效果优于7天,泄浊化瘀组优于温补脾肾组.     

水苏碱对肾纤维化大鼠肾组织CHOP、caspase-3作用

研究水苏碱对肾纤维化大鼠肾组织CHOP、caspase-3作用的研究.采用单侧输尿管梗阻(UUO)诱导大鼠肾间质纤维化动物模型,以依那普利为阳性对照药,将大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组、水苏碱高、中、低剂量组.术后第14 d处死大鼠,收集血清测定血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);采用HE染色检测肾小管损伤指数,Masson染色对肾间质胶原相对面积进行半定量分析;采用免疫组织化学方法检测肾组织中内质网应激特异转录因子(CHOP)、细胞凋亡因子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达.各治疗组与模型组比较大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质纤维化程度、血清Scr、BUN水平及肾组织CHOP、caspase-3蛋白表达有差异(P0.05;P0.01).水苏碱与依那普利组比较,大鼠肾组织CHOP、caspase-3表达降低(P0.05),肾小管间质损伤及肾间质纤维化程度明显降低(P0.05),肾功能Scr、Bun明显降低(P0.05).水苏碱可能通过下调内质网应激相关凋亡途径CHOP、caspase-3表达,干扰内质网应激特异转录因子的传导通路,抑制细胞凋亡的表达,从而减缓肾间质纤维化的发生和发展.     

促肝细胞生长素改善单侧输尿管梗阻大鼠肾脏纤维化的研究

目的:研究促肝细胞生长素(hepatocyte growth-promoting factor,pHGF)改善梗阻性肾病肾小管间质纤维化的疗效和机制.方法:17只SD大鼠随机分为假手术组(SOR)、单侧输尿管梗阻组(UUO)和pHGF治疗组.给药组用促肝细胞生长素pHGF(30 μg·kg-1·d-1)大鼠腹腔注射,其余组给予等剂量生理盐水.14 d后收获大鼠.通过测定肾皮质羟脯氨酸含量比较纤维化改变;肾脏病理分析用H.E.和Masson染色,免疫组化检测TGF-β1,α-SMA,FN在肾组织中的表达.结果:肾组织羟脯氨酸定量UUO组明显高于SOR组,pHGF组,pHGF组介于二者之间,P＜0.01;Masson染色SOR组仅在血管和基底膜处有绿染的胶原纤维,UUO组胶原成分增多,而pHGF组较UUO组明显改善,P＜0.01.免疫组化显示pHGF能明显降低梗阻肾组织TGF-β1,α-SMA,FN的表达水平降低,与UUO组比较,P＜0.01.结论:pHGF能有效缓解梗阻性肾病肾小管间质纤维化.     

内质网应激相关蛋白在肾纤维化大鼠肾组织中的表达

探究内质网应激(ERS)相关蛋白在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化中表达的调节。将大鼠随机分为假手术组及UUO模型组,UUO组行左侧输尿管结扎术,于术后3、7和14d Masson染色观察肾脏病理变化;眼底静脉丛取血,分离血清测定血尿素氮及肌酐;Masson染色对肾间质胶原相对面积进行半定量分析;免疫组化法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA);Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、内质网源性转录因子(CHOP)、凋亡相关蛋白半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)及caspase-12蛋白表达。模型组与对照组比较大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质纤维化程度、血清Scr、BUN水平及肾组织CHOP、caspase-3蛋白表达有差异(P0.05;P0.01)。与假手术组相比,UUO模型组可见:1)肾小管扩张和肾间质纤维化程度随输尿管梗阻时间延长而渐进性加重;2)GRP78、CHOP、caspase-3及caspase-12蛋白表达在术后3d均有上调,随着梗阻时间延长,上述蛋白表达更显著(P0.01)。内质网应激相关标志性蛋白在UUO大鼠肾间质纤维化的早期即存在表达上调,可能促进了肾间质纤维化不断进展。有望通过干扰内质网应激特异转录因子的传导通路,抑制细胞凋亡的表达,从而可减缓肾间质纤维化的发生和发展。     

通腑泄浊法对CKD模型大鼠肾功能及肠道屏障功能的影响

目的探讨通腑泄浊法对慢性肾脏病(CKD)模型大鼠肠道屏障功能的影响,初步探讨其延缓CKD进展的机理。方法应用5/6肾切除法构建CKD大鼠模型,SD雄性大鼠120只随机分为空白组,模型组,通腑泄浊组(高、中、低剂量),药用炭组,每组20只,从模型建立后开始灌肠,疗程4周,第4周末检测血清肌酐,血硫酸吲哚酚水平,观察肾组织病理结构变化。结果 CKD模型组大鼠肾组织可见肾小管上皮细胞变性、间质炎性细胞浸润、纤维组织增生等病理变化,通腑泄浊组与CKD模型组大鼠相比较均有不同程度的改善,其中以通腑泄浊高剂量组改善最为明显。通腑泄浊各剂量组和药用炭组血内毒素、D-乳酸含量明显下降(P0.05),且高剂量组比药用炭组下降更为明显(P0.05)。结论通腑泄浊法具有一定的保护肾脏和抗肾间质纤维化的作用,降低大鼠血内毒素、D-乳酸含量,保护肠粘膜屏障功能可能是其机制之一。     

口服蛋氨酸造成的大鼠肾间质纤维化模型及其机制研究

目的:研究口服蛋氨酸造成的大鼠肾间质纤维化模型及叶酸的治疗作用,同时观察同型半胱氨酸对人近曲小管上皮细胞增殖的影响,并初步探讨其机制。方法:24只普通SD大鼠随机分成三组,分别灌以双蒸水,蛋氨酸,蛋氨酸+叶酸,120天后处死大鼠,测定血浆同型半胱氨酸浓度,观察肾间质纤维化程度及检测组织中E-钙连接蛋白的表达;同时培养人近曲小管上皮细胞,观察同型半胱氨酸单独处理及叶酸联合处理后细胞的增殖情况及α-平滑肌肌动蛋白、E-cad的表达。结果:(1)蛋氨酸组血浆同型半胱氨酸水平较对照组显著升高,肾间质出现一定程度的纤维化,组织中E-cad的表达显著下调。(2)细胞中E-cad的表达显著下调、α–SMA的表达显著增高,细胞增殖明显。(3)叶酸治疗能显著减轻蛋氨酸所致的高同型半胱氨酸血症和肾间质纤维化,上调E-cad的水平,降低α-SMA的表达,抑制细胞的增殖。结论:通过口服蛋氨酸促发高同型半胱氨酸血症能诱导肾间质纤维化,其机制可能与肾小管上皮细胞的异常增殖及肾小管上皮转分化有关;叶酸能对抗这一作用。     

复方三芪提取物对NMDA致大鼠视网膜损伤的保护作用

目的:研究复方三芪提取物对由N-甲基-D天门冬氨酸(NMDA)诱导的大鼠视网膜损伤模型的保护作用.方法:20只SD大鼠随机分为5组:正常对照组、模型组、复方三芪提取物低、中、高剂量组.模型组和给药组大鼠于右眼玻璃体内注射2μL 40 nmol.L-1NMDA,制备视网膜神经元损伤模型.给药组在NMDA注射前7 d起给予复方三芪提取物灌胃(3.903,7.805,15.61 g.kg-1.B.W.);正常对照组和模型组则给予等剂量的生理盐水灌胃.注射NMDA 7 d后静脉取血,测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,取眼球组织,切片HE染色,观察视网膜厚度,并对视网膜视神经节细胞层(RGCL)神经元进行计数.结果:模型组大鼠RGCL神经元个数为正常组大鼠的51±6%.同模型组相比,复方三芪提取物(3.903,7.805,15.61 g.kg-1.B.W.)能剂量依赖性地增加RGCL神经元个数(P<0.05),依次为正常组的69±6%,89±7%,103±7%.复方三芪提取物(7.805 g.kg-1.B.W.)显著提高大鼠血清SOD活性并降低MDA含量(P<0.001).结论:复方三芪提取物能抑制NMDA诱导的视网膜脂质过氧化,并能阻止大鼠视网膜神经元进行性丢失,对NMDA诱导损伤的大鼠视网膜有修复作用.提示复方三芪提取物可能具有促进神经元的再生作用.     

温阳活血方对体外鼠肾成纤维细胞 FN、LN表达的影响

目的:探讨纤维粘连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)在体外鼠肾成纤维细胞的表达及温阳活血方的干预作用.方法:体外培养健康SD大鼠肾成纤维细胞,随机分为6组:假手术组、模型组、温阳活血方组、肉苁蓉组、桃仁组、福辛普利组.检测药物血清干预细胞72h培养上清中FN、LN浓度.结果:(1)模型组FN、LN浓度显著高于假手术组,各药物组对FN、LN均有抑制作用.(2)对FN的抑制作用除福辛普利各剂量组无显著差异外.其他同一药物的不同剂量间呈现一定的剂量依赖性;温阳活血方大剂量组显著低于桃仁和肉苁蓉大剂量组:各药物中剂量组间无显著差异;各药物小剂量组,温阳活血组低于桃仁组,高于肉苁蓉组,差异有显著性.(3)对LN的抑制作用除桃仁各剂量组间无差异外,其他同一药物的不同剂量间呈现一定的剂量依赖性:各药物大剂量组问差异无显著性;各药物中、小剂量组,温阳活血组小于福辛普利组和桃仁组,差异有显著性,与肉苁蓉组比较差异无显著性.结论:温阳活血方可能通过抑制成纤维细胞分泌FN、LN,进而减少细胞外基质(ECM)堆积,从而对肾间质纤维化起治疗作用.     

芪蛭降糖片对链脲佐菌素诱导的大鼠糖尿病肾病的保护机制

采用链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病模型,模型建立后分别采用人体等效日剂量的芪蛭降糖片、盐酸二甲双胍片和格列本脲片每日1次灌胃治疗,时间3个月,治疗结束后观察大鼠糖尿病肾病的动态变化,探讨芪蛭降糖片对STZ诱导的糖尿病大鼠肾病的保护作用,并采用网络药理学分析其可能的作用机制.检测指标包括血糖,尿常规,尿微蛋白(MAU),血清肌酐(CRE)和血尿素氮(BUN),肾组织TGF-β1、NF-kB及Caspase-3表达量的变化和肾脏病理变化.结果显示,模型组大鼠一直保持高血糖状态,多饮多食多尿现象明显,体质量进行性降低,MAU、CRE和BUN含量增加,肾组织TGF-β1、NF-kB及Caspase-3表达量增高,肾组织损伤明显,表现为肾小球体积增大、小球系膜细胞增生、膜基质增厚、肾小管空泡样变性.盐酸二甲双胍片和格列本脲片虽对高血糖、多饮多食多尿现象、消瘦有改善作用,但对MAU、CRE和BUN含量以及肾组织损伤改善作用不明显.芪蛭降糖片降糖作用不及盐酸二甲双胍片和格列本脲片起效快,但改善多饮多食多尿和消瘦方面与二者相似,且明显促进肾组织损伤修复,降低MAU、CRE和BUN含量及肾组织TGF-β1、NF-kB及Caspase-3表达量.网络药理学分析表明,芪蛭降糖片通过PI3K-Akt信号通路、胰岛素抵抗信号通路、Jak-STAT信号通路等调节胰岛素分泌、信号转导、细胞增殖、炎症反应来阻止肾脏损伤.以上结果表明,芪蛭降糖片可以促进糖尿病大鼠肾脏损伤修复,是一种应用前景较好的糖尿病肾病并发症防治药物.     

甲泼尼龙对单侧输尿管梗阻诱导的肾纤维化的影响

为探讨甲泼尼龙在小鼠肾纤维化中的作用,本文通过单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO)实验建立肾纤维化模型。实验将25只雄性Balb/c小鼠随机分为假手术组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。手术后第2天给药,14 d后,使用HE染色和Masson染色检测各组小鼠肾脏病理变化情况。Western blotting和IHC染色检测各组梗阻侧肾脏中Col-1、Col3A1、FN、α-SMA的表达情况以及TGF-β/Smad和NF-κB信号通路中蛋白的表达情况。结果显示UUO会导致小鼠肾间质纤维化,甲泼尼龙能显著减弱UUO小鼠肾间质细胞外基质Col-1、Col3A1、FN、α-SMA的生成,下调TGF-β/Smad和NF-κB信号通路中蛋白的表达。由此可知,甲泼尼龙对小鼠肾纤维化有明显的改善作用,它通过抑制TGF-β/Smad和NF-κB信号通路来减轻UUO诱导的肾纤维化。     

过度训练对大鼠机体及肾功能的影响

研究了过度训练对大鼠机体及肾功能的影响.采用BECKMAN 自动生化分析仪、紫外可见分光光度计、MA- 4210 型全尿微量自动分析仪以及放射免疫测定技术,对游泳过度训练的SD大鼠血浆血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、血浆尿酸(PTr)、血浆尿素氮(BNU)含量及血浆肾素(PRA)活性和尿蛋白(Upro)含量等进行了测试分析.结果表明,过度训练可导致血、尿上述指标显著升高,尿pH值显著降低,提示过度训练会导致机体及肾功能发生疲劳性过度损伤.     

家兔肾动脉的解剖学研究

用血管铸型方法，观察研究了家兔肾动脉的分支分布情况，家兔肾动脉无论左侧或右侧都为一条，肾动脉的一级分支以２支者为多，占７５％，肾内动脉的分支情况和类型常随肾动脉一级支类型而异，多数是按分散的“复支型”排列。     

高山兀鹫的肾脏组织学研究

应用大体解剖技术、H.E和PAS染色法,对高山兀鹫的肾脏进行了组织学观察.结果显示:高山兀鹫肾脏被膜无脂肪囊,只有纤维膜.肾小叶皮质与髓质分界不明显,肾小体体积小,数量多,以小叶内中央静脉为圆心,环绕在其四周.肾小球毛细血管分支少,结构简单.肾小体与小叶间静脉之间分布有近曲小管,肾小体与小叶内中央静脉之间分布有远曲小管,肾小叶四周有小叶周集合管.肾小叶髓质有大量集合管和少量髓袢.肾小球血管极有肾小球旁复合体.     

Multi-barrelled K channels in renal tubules

Most ion-channels have several kinetically distinct open and closed states. However, a number of groups have reported the presence of sub-conductance states within the open states. It is not clear whether these sub-conductance states represent a partially-occluded open state (with restricted diffusion), or whether they indicate the presence of parallel conductive units. Here we present evidence for the presence of four parallel, equally-conductive subunits that make up a K-selective channel in the apical membrane of early distal tubule in the kidney of Amphiuma. The overall open probability of the channel is controlled by a main gate, the kinetics of which can be described by a simple two-state (open or closed) model. This main gate acts either to occlude or to expose the four subunits in unison. The subunits seem to gate independently both of the main gate and of one another, their open probability obeying the binomial distribution.     

苯那普利、氯沙坦在冷冻致慢性肾衰模型的疗效比较

目的　以冷冻致慢性肾衰模型比较苯那普利及氯沙坦的疗效.方法　用液氮冷冻大鼠肾建立慢性肾衰模型,采用临床诊断试剂盒检测大鼠血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)水平,采用放免法测定血浆血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)水平,采用G250法测定24h尿蛋白量(UP·d-1),并进行肾脏病理学检查,比较假手术组、模型组、苯那普利治疗组及氯沙坦治疗组动物上述指标的差别.结果　与假手术组相比,模型组大鼠在造模后1周出现肾功能损伤,并持续至造模后4周;血浆ANGⅡ水平在造模后1周升高,以后逐渐下降;造模后4周部分肾间质及少数肾小球出现病理改变.苯那普利及氯沙坦治疗组对BUN及Src无明显影响,但可降低UP·d-1水平,其缓解尿蛋白作用,氯沙坦略好于苯那普利.苯那普利在造模后1至2周血浆ANGⅡ水平较模型组降低.病理检查结果表明,苯那普利组动物肾脏病变程度较模型组略轻.氯沙坦组动物肾组织基本病变同模型组.结论冷冻大鼠肾可引起肾功能损伤,在缓解尿蛋白方面,氯沙坦略好于苯那普利,对肾小球病理改变的影响,苯那普利略好于氯沙坦.     

基于网络药理学及分子对接探讨淫羊藿对顺铂诱导的肾损伤保护机制

通过中药系统药理学数据库与分析平台TCMSP探索淫羊藿化学成分,在Gene Card中搜索肾损伤的相关基因,构建化学成分-作用靶点网络图、蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI)网络图;借助DAVID进行通路富集分析(kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)和生物功能富集分析(biological function enrichment, GO),利用Schrodinger Maestro软件和在线工具进行分子对接验证,预测核心靶点;进行动物实验,取小鼠血清检测尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白介素6(IL-6)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察肾脏病理结构变化。网络药理学共筛选出18个化合物与58个靶点蛋白参与网络构建,基因富集分析显示,涉及120个GO条目(P<0.05),KEGG信号通路共73条,分子对接表明,淫羊藿活性成分与关键靶点之间有较强的结合效果。动物实验表明,与模型组相比,淫羊藿水提物能使小鼠血清中BUN、CRE、IL-6、TNF...