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1.
瓢虫干标本基因组DNA的提取及RAPD分析 总被引:11,自引:0,他引:11
实验对保存多年的瓢虫干标本进行了基因组 DNA提取和 RAPD-PCR扩增。结果显示 DNA分子的提取与保存年代长短无直接关系;RAPD-PCR增产物经琼脂糖凝胶电泳检测,分子量大小约为 1984bp~630bp;不同种瓢虫的 DNA用同一引物,扩增片段是多态表现,同一种瓢虫的干标本保存时间虽不同,但扩增产物中均具有相同的DNA片段。 相似文献
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固定标本的DNA提取及PCR扩增 总被引:7,自引:1,他引:6
报道富尔马林、酒精固定的日本绒螯蟹标本的DNA提取及PCR扩增,并与冷冻、煮沸标本进行了比较。结果表明,福尔马林固定标本与酒精固定标本一样可以撮加入的蛋白酶K量越多,DNA的回收率越高。以提取的DNA为模板,进行了线粒体DNA12SrRNA和D-1ooP基因片段的PCR扩增,经琼脂糖产电泳PCR扩增产物后均得到了与期待的碱基长度相一致的清晰谱带。 相似文献
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中国人P型铜转运ATP酶基因突变的初步研究 总被引:2,自引:0,他引:2
应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)及测序等方法分析了141便WD患者ATP7B基因第7、9及14外显子的部分DNA序列改变,通过对患者DNAT下沉人DNARPCR-SSCP电泳带迁移作对比分析,发现在141例患者中第7、9及14外显子PCR扩增产物迁移异常才分别为4例、6例和40例,依据DNA物单链构聚与分子电泳迁移的关系,提示该组病人中ATP7B基因第7、9和14外显子的突变率 相似文献
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首次将AP-PCR应用于DNA多态性研究.研究AP-PCR的反应程度,找到实现稳定扩增的适宜条件,并发现模板DNA浓度的变化在相当范围内不会改变扩增图谱;对肿瘤、瘤周组织以及正常组织进行分析,在11个引物中发现2个引物的扩增结果是多态的.初步结论:多态现象与癌变相关. 相似文献
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首次将AP-PCR应用于DNA多态性研究。研究了AP-PCR的反应程度,找到实现稳定扩增的适宜条件,并发现模板DNA浓度的变化在相当范围内不会改变扩增图谱;对肿瘤瘤周组织以及正常组织进行分析,在11个引物中发现2个引物的扩增结果是多态的。初步结论:多态现象与癌变相关。 相似文献
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一种简单,快速植物RAPD分析DNA提取方法 总被引:8,自引:0,他引:8
随机引物扩增多态性DNA(RAPD)分析实验中的植物总DNA提取方法已有很多文献进行过详细阐述和讨论[1~ 5] ,同时 ,邹喻萍等[6] 对于濒危植物RAPD分析 ,尤其是植物DNA难于提取的种类如银杉、矮壮丹、南川剑麻的总DNA提取鉴定进行了较理想的改进 .但以往的DNA提取一般费时较长、工序繁琐 .本实验采用普遍使用的CTAB法提取曼陀罗DNA ,根据在实验中的摸索 ,对植物总DNA的提取条件作了较大改进 .用此方法提取的DNA能直接用于RAPD ,PCR ,RFLP等分子生物学实验 .1 材料与方法1 .1 材料 曼陀罗 (D… 相似文献
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研究了人工合成的二元藻胆体模拟复合物(R-PC/APC)的时间分辨荧光光谱并运用多指数拟事的以数据进行了详细的处理和分析,研究结果证实了能量在R-PC和APC之间的传递时间与人R-PE传递到R-PC的时间几乎相等;除此之外,R-PC到APC没有其它传冯通道,结果为可以从R-PE直接传递到APC同时也可以经过R-PC传递到APC,R-PC作为能量传递中间受体,在实际的体系中其作用是通过竞争的机制实现 相似文献
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用PCR扩增和克隆鸡贫血病毒衣壳蛋白VP2基因 总被引:1,自引:0,他引:1
接种鸡贫血病毒(CAV)Cux-1毒株于MDCC-RP1细胞中,并用经狄高辛标记的CAV衣壳蛋白VP1基因克隆DNA作为探针在斑点杂交中检测和比较了各代细胞中CAV DNA水平。通过聚合酶链式反应(PCR),从CAV DNA水平较高的MDCC-RP1细胞基因组DNA中扩增出CAV衣壳蛋白VP2基因片段约650bp的编码序列,将该PCR扩增的产物于EcoRI和KpnI位点克隆到pUC19质粒载体中, 相似文献
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李晓青 《福建师范大学学报(自然科学版)》1999,15(3):84-88
提取介质中加入2.5%β-巯基乙,能有效却除次生物质对林黄基因组DNA提取的影响。用新方法所提DNA产率比用前人方法提出的高出0.8倍左右,鉴定2结果表明:鲜小枝、干小枝的DNA样品皆为48kb左右,适于限制性酶切和RAPD反应;同时发现同一株树的鲜小板、干小枝,基因组DNA RAPD扩增可得到相同的产物。 相似文献
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加工番茄多聚半乳糖醛酸酶(PG)基因的cDNA克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
以加工番茄87-5为材料,运用反转录PCR(RT-PCR)技术成功地将PG基因的cDNA序列克隆到pGEM-T载体上,并利用酶切及PCR进行了初步鉴定。 相似文献
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苏芸金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌基因组DNA同源性及多态性的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
用RAPD-PCR扩增到61个标准株、生产用菌株及24个蜡状芽孢杆菌参比菌株的全DNA指纹图,通过计算多态性扩增片段的大小,利用NTSYS软件进行聚类分析,蜡状芽孢杆菌菌株并未形成独立于苏芸金芽孢杆菌的聚群,这是此近缘种DNA分子水平高度同源的新证据.61个苏芸金芽孢杆菌的聚类结果表明:其DNA指纹图与H-血清型有一定相关性.与引物0955-03相比,引物0940-12对苏芸金芽孢杆菌不同亚种及蜡状芽孢杆菌菌株具有更高的鉴别价值,大多数特异株DNA全指纹图有菌株特异性,证实RAPD-PCR技术是苏芸金芽孢杆菌及蜡状芽孢杆菌种下分类和鉴定的简便快速有效的方法 相似文献
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将含完整阅读框架的人t-PA(tissue-ytpe plasminogen activator,t-PA)cDNA克隆至昆虫细胞表达转移载体pBacPAK8中,获得重组质粒pBac-tPA。应用脂质体共转染法,将pBac-tPA和线性化杆状病毒BacPAK6 DNA共转染Tn-5B-1昆虫细胞。经空斑筛选获得11株重组病毒。经PCR鉴定与生物活性测定,获得一株高效表达t-PA的重且病毒BactP 相似文献
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半套式PCR技术在植物基因克隆中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
杨明挚 《云南大学学报(自然科学版)》1998,20(5):377-379
常规PCR方法在分离克隆已知序列的基因中发挥着重要的作用,但要求目的基因片段与引物间的同源性几乎是100%,一旦引物序列与目的基因间存在有差异,便往往会导致扩增的特异性不强,扩增效率不高,给克隆带来很大的困难.在常规PCR基础上,若所分离的基因在不同植物间存在保守序列,依据这一序列再合成一对引物,进行半套式PCR则能大大提高扩增的特异性及扩增效率.对于较长的基因片段而言还能同时完成亚克隆.本文依据南瓜GPAT(甘油-3-磷酸酰基转移酶)基因cDNA序列及比较拟南芥菜、豌豆间在该基因内的保守区段序列合成相应引物来分离克隆黑子南瓜及西瓜GPAT基因的cDNA片段为例来说明半套式PCR技术在植物基因克隆中的应用 相似文献
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报道BMP-3及BMP-5在不同组织细胞中的表达,将人的神经终细胞瘤SK细胞的总RNA及人的脑,肝,胸腺,脾,胎盘及睾丸的总RNA反转录成cDNA作为模板,利用设计的编码BMP-3和BMP-5成熟蛋白的专一性引物分别扩增出相应的片段。PCR产物的琼脂糖凝胶电泳结果表明,BMP-3及BMP-5在不同组织细胞中表达类型不同。 相似文献
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刺五加遗传多样性的RAPD分析 总被引:11,自引:0,他引:11
选取我国东北哈尔滨地区刺五加3个居群共49个单株的新鲜叶片,提取化基因组DNA〈使用OPA和OPB系列8个随机引物进行PCR反应,对DNA样本做RAPD分析,3个居群多态RAPD位点的百分数分别为93.5%,91.3%和97.6%;3个居的平均遗传距离分别为0.241,0.363和0.388;3个居群两两单株之间的平均遗传距离分别为0.345,0.390和0.412,结果表明刺五加种内居群内和居 相似文献
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应用聚合酶链式反应检测犬细小病毒 总被引:6,自引:0,他引:6
将具有犬细小病毒病典型症状的病犬肠溶物经SDS-酚裂解法提取总DNA,并以此DNA为模板,通过人工合成的两条20mer引物进行PCR扩增,该对引物扩增的片段为犬细小病毒结构蛋白VP2基因中间1/3区段,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,试验结果表明:用PCR扩增检测犬细小病毒具有良好的特异性,应用该方法检测的27份病犬肠溶物样品块获得了预计长度的DNA片段(531bp),而健康犬的肠溶物样品PCR结果为 相似文献
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以人脾cDNA为模板,通过PCR获得La多肽(全长)的DNA片段。将此片段利用双酶定向克隆到MBP(麦芽糖结合蛋白)融合系统的载体pMALTM-c中得以表达。经免疫印迹实验证明,表达后的产物具有La多肽的特异性,敏感性则超过生化制备的ENA制品。 相似文献