固定化桔青霉发酵核酸酶P1的研究

以玉米芯颗粒吸附桔青霉(Penicillium citrirum)孢子，再用1．5％的海藻酸钠包埋吸附固定化细胞玉米芯颗粒，于摇瓶中进行分批培养。实验结果表明：在固定化细胞产酶的条件下，培养基中淀粉水解糖浓度为9g／L，蛋白胨浓度为1g／L，摇瓶转速为180r／min，产酶发酵周期为50h，发酵液中核酸P1的活力高达503U／ml。双载体固定化细胞经30批次连续重复发酵产酶稳定在较高水平，固定化细胞粒子机械强度高。     

桔青霉发酵生产核酸酶P1的适宜条件

研究了桔青霉生产核酸酶Ｐ１的适宜培养基和培养条件，培养其组成为：葡萄糖７％，蛋白胨１％，玉米浆０．２％，磷酸氢二钾０．０５％，磷酸二氢钾０．０５％，氯化钙０．０４％，硫酸锌０．０２％，硫酸镁０．０３％，硫酸锰０．０５％，ｐＨ５．４，３０℃发酵６６ｈ酶活达最高值，粗酶液酶活力４００ＩＵ／ｍＬ。     

气升式发酵罐生产核酸酶P1发酵过程的动力学

利用15L外循环气升式反应器，初步研究了桔青霉分批式液体深层发酵生产核酸酶P1的发酵动力学过程。Logistic模型可以较好地反映菌体的生长动力学规律，Luedeking-Piret则比较好地描述了发酵过程中的核酸酶P1的活力与菌体生长的关系，并利用此模型可以判断桔青霉发酵生产核酸酶P1的过程中，核酸酶P1的产出与菌体的生长是属于部分耦联的，其发酵过程属于部分耦联型发酵。     

桔青霉生产核酸酶P1发酵条件优化研究

选用经紫外线诱变的桔青霉茵株ZM-48，采用单因子和正交试验对生产核酸酶P1的发酵条件进行了优化研究，筛选得到最佳培养基组分为(除麸皮浸出汁为体积分数外，其余均为质量分数)：葡萄糖和麸皮浸出液各3％，蛋白胨和酵母膏各0．3％，K2HPO4和KH2PO4各0．05％，CaCl2 0．08％，MgSO4和MnSO4各0．049／6，ZnSO4 0．02％；发酵条件为：起始pH值5．69，接种量10％，温度34℃，摇床转速180r／min，发酵时间72h。在此优化条件下，桔青霉发酵液的核酸酶P1活力从实验初的140U／ml提高到240U／m1．     

核酸酶P1的纯化和酶学性质研究

桔青霉发酵液通过硫酸铵分级沉淀、凝胶层析和离子交换纤维素层析等生化分离步骤，得到的核酸酶P1比活力为711U/mg，纯化倍数1500。纯化的酶蛋白纯品经SDS－聚丙烯酰胺电泳，呈现一条单带。该酶催化反应的最适pH范围为6－8，最适温度在70℃，在60℃以下时酶活较为稳定，锌离子对此酶有明显的激活作用，而铜离子具有明显的抑制作用。     

一株高产核酸酶P1菌株的诱变选育

以一株核酸酶P1产生茵桔青霉050421作为出发菌株,经过紫外线(UV)诱变处理,得到菌株050421-A,其产酶活力比出发茵株提高了约68.1%;将此菌株再经过化学试剂LiCl处理,得到遗传稳定性较好的茵株050421-A-AB,产酶活力在UV诱变基础上提高了40.05%,比原始出发茵株050421提高了约138.88%.     

核酸酶P1产生菌的诱变选育

以核酸酶Ｐ１产生菌桔青霉ＡＳ．３．２７８８为出发菌株，经过诱变处理，获得了产核酸酶Ｐ１的变异株Ｈ１０１５。该菌株在葡萄糖培养基上直接发酵７２ｈ，核酸酶Ｐ１的酶活力达到３４５ｕ／ｍｌ，比出发菌株酶活力提高了２０多倍。     

磁性交联核酸酶P1聚集体的制备及性质研究

采用磁性纳米颗粒与酶蛋白共沉淀后经戊二醛交联的方法,制备了磁性交联核酸酶P1聚集体,并且对比分析了游离酶和固定化酶的部分酶学性质.优化的最佳制备条件为:硫酸铵质量浓度为0.8 g/mL,沉淀时间为0.5 h,戊二醛体积分数为0.6%,交联时间为2 h,所制得的固定化酶活性回收率为32.4%.酶学性质研究表明,固定化酶的Km值(30.7 mmol/L)明显高于游离酶的(7.27 mmol/L),二者最适反应温度分别为90℃和75℃,最适pH值均为5.2,固定化核酸酶P1对热和酸碱的耐受性明显增强,连续反应6次后酶活力仍保留70%,良好的操作稳定性和磁响应性有利于核酸酶P1的工业化应用.     

扑草净降解酶的固定化及其对受污染土壤的生物强化研究

提取扑草净降解优势菌Pseudomonas FR粗酶液，以藻酸钠作为包埋剂将酶液固定化，比较固定化酶与游离酶对扑草净的作用效果，结果表明，理想条件下，固定化酶的活性相当于游离酶液活性的79％，但温度、pH值等条件的变化对固定化酶的影响很小；对固定化载体进行了优化，确定纤维系为适宜的添加剂，利用固定化酶对受污染土壤进行处理，经六周检测，土壤中扑草净的含量减少85％．     

固定化生物反应器乳酸发酵的研究

对不同类型的固定化细胞的基本参数，发酵方式，发酵情况进行了比较研究，采用膜生物反应器发酵，主要指标优于国内报道水平，为工业化应用提供了理论依据。     

PVA固定化红曲霉发酵生产红曲色素的研究

进行了采用聚乙烯醇固定化红曲霉细胞和游离红曲霉细胞发酵发生红曲色素的比较研究。实验结果表明：采用聚乙烯醇为载体固定化细胞颗粒机械强度高,产色素高,尤其通过添加话性碳解除产物抑制作用后。     

固定化细胞技术应用于废水处理的研究进展

详细介绍了固定化细胞的制备方法、载体特性、反应特性,探讨了固定化技术在废水处理中的应用现状,并指出了固定化细胞技术的发展方向。     

固定化红曲葡萄糖母液流加发酵红曲色素的研究

对固定化红曲以葡萄糖为原料，在生物反应器中流加发酵生产红曲色素进行了研究，建立了简单的数学模型控制流加。结果表明，当总葡萄糖母液浓度为１５０ｇ／Ｌ时，９０ｇ／Ｌ初始葡萄糖母液开始发酵，当流加控制因子Ｋ＝０．００１３时，变速流加发酵组的色素浓度比非流加发酵组的色价增加３２％。     

人参皂甙Rg1对3T3细胞增殖作用的研究

利用MTT比色分析法和Brdu增殖细胞标记法,检测不同浓度GRg1对3T3细胞增殖的影响.发现GRg1在适当浓度范围内可以促进3T3细胞的增殖,为进一步探讨GRg1的药理作用及对胚胎发育的作用机理提供一些研究基础.     

Effect of P15INK4b expression on the cell cycle and G1 phase related regulatory genes in human melanoma cells

Using the transfeetion teehnique. P15INK4b was introduced into P15INk4b gene deleted human melanoma A375 cells,and a cell model MLED6 overexpressing P15INK4b WAS CONSTRUCTED.Comparing with the control cells MLC2,MLEK6cells in G1phase increased by 11%,but those in Sphase decreased by 15%by FCM.By the method of thymidine(TdR)and N2O arresting,the proportions of synchronized Mphase cells of MLEK6 ana MLC23 were measured and found to be 89.1% and 76.8%respectively ,and the cells in G1phase were 74.3% for MLID6 AND 76. 4% forMLC2.The result of3 H-TdR incorporation indicated that the transition of G1/Sof MLEK6 cell was delayed 2h as compared with that of MLC2 cells,and incorporation rate also decreased.The observation on exprissions of some G1/ S-resates relatory rigusating genes showed that in MLIK6 cells the protein leves of P27KIPI increased with the decreasing expressions of cyclinD1,cyclinE and c-myc,especially cyclinD1 in late G1phade.The expression of cyclinE obviously decreased at G1/S transition ,and c-myc wad inhibited throughout all the process of G1 S phase.All the risults suggest that P15INK4b can delayG1/S transition of MLEK6 cells by inhibiting the cell cycle engine ,and by increasing the expression of Cdk ingibitor P27KIPI in different stages of G1 phase.     

高温高压油气藏试产期间固井水泥环力学完整性——以准噶尔盆地南缘高探1井为例

准噶尔盆地南缘超深层勘探已成为中国石油天然气勘探的重点领域,钻完井工程面临诸多高温高压环境的挑战.在完井试产期间,井筒温度和压力的大幅度且快速下降会改变水泥环应力,易导致套管和水泥环收缩不平衡,产生微间隙.为此,采用厚壁圆筒弹性力学理论,建立了套管-水泥环-地层组合体弹性力学模型,利用有限差分程序求解.研究认为,高温高压油气藏试产期间,水泥环的主要失效形式为收缩微间隙失效.以准噶尔盆地南缘高泉背斜高探1井试产为例,评价试产过程中水泥环失效时井筒压降及温度变化临界值,以及两者与水泥石力学参数的相互关系.该力学评价方法的研究对于高温高压油气藏试产期间水泥环完整性评价具有较高的应用价值.