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相似文献
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1.
构建了肌肉特异表达IGF-1载体,并转染绵羊成纤维细胞获得了稳定整合外源基因可用于细胞核移植的转基因细胞.通过人工合成骨骼肌特异启动子SP片段,与羊IGF-1相连,最终连接到骨架载体pCDsRed2中构建成骨骼肌特异表达IGF-的真核表达载体pSPICDS.使用脂质体法转染绵羊成纤维细胞,通过红色荧光与G418双重选择,获得了转基因细胞.经PCR检测证实得到的细胞克隆外源基因稳定整合,可以作为供体细胞用于体细胞核移植.  相似文献   

2.
为了摸索小鼠胎儿成纤维细胞冷冻保存的简易方法,采用常规冷冻和玻璃化冷冻2种模式,探讨了不同的冷冻方法、不同的冷冻前平衡时间、不同的冷冻保护液的配比等因素对成纤维细胞冷冻效果的影响。实验结果表明:常规冷冻采用含10%(体积分数)甘油的DMEM液作保护剂,可将0~5℃下平衡时间缩短至45~60 min,细胞活力可达0.87。玻璃化冷冻采用10%(体积分数)NBS+1.8 mol/L乙二醇+0.1 mol/L蔗糖的PBS冷冻小鼠胎儿成纤维细胞效果好于其他组合,细胞活力可达到0.86。玻璃化冷冻法与常规冷冻法的冷冻效果差异不显著。  相似文献   

3.
构建IGF1基因的毛囊特异表达载体,可为今后通过体细胞核移植技术建立转基因克隆绒山羊准备核供体细胞.将绵羊IGF1 cDNA序列,连接到含有UHS启动子序列的克隆载体p19TU的SalI、SphI位点,获得过渡质粒载体p19TUI;pCDsRed2和过渡质粒载体分别经酶切和连接构成表达载体pCDsR-UI.以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞,外源性表达载体以脂质体方法转染所培养的第2代成纤维细胞,DMEM/F12+ 10% FBS、37℃5%CO2中培养,经添加G418筛选,获得了稳定表达红色荧光蛋白的细胞克隆,经特异性PCR鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中.转基因前后分析细胞生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数正常.  相似文献   

4.
目的 :观察基因重组牛碱性成纤维细胞生长因子 (rbFGF)对急性创面和慢性创面愈合的促进作用。方法 :治疗组 (12 82例 )和对照组 (439例 )被分为深Ⅱ度烧伤、浅Ⅱ度烧伤、供皮区 (包括刃厚和中厚供皮区 )和慢性 (包括残余小创面和慢性溃疡 )创面 4大类。分别观察应用rbFGF后不同时间创面愈合面积的百分比、创面完全愈合时间 ,以及用药前后的全身情况和不良反应。结果 :浅Ⅱ度烧伤 8d愈合率和创面完全愈合时间 ,对照组为 5 1 7%± 2 6 4 %和 (12 6± 2 9)d(P <0 0 0 1) ,治疗组为 70 6 %± 2 5 0 %和 (10 5± 2 4 )d(P <0 0 0 1)。深Ⅱ度烧伤 15d愈合率和创面完全愈合时间 ,对照组为 5 3 3%± 2 5 4 %和 (2 1 9± 5 5 )d(P <0 0 0 1) ,治疗组为 6 9 7%± 2 7 0 %和 (18 5± 4 4 )d(P <0 0 0 1)。供皮区创面 8d愈合率和创面完全愈合时间 ,对照组为 5 7 6 %± 2 9 4 %和(11 4± 2 7)d(P <0 0 0 1) ,治疗组为 72 1%± 2 8 0 %和 (9 5± 2 4 )d(P <0 0 0 1)。慢性创面完全愈合时间 ,对照组为 (2 8 0± 18 0 )d ,治疗组 (2 2 1± 16 )d(P =0 0 6 8)。用药前后血常规、肝、肾功能无异常变化。结论 :基因重组牛碱性成纤维细胞生长因子能够显著地促进创面  相似文献   

5.
胎牛成纤维细胞的分离培养   总被引:1,自引:0,他引:1  
应用组织块培养法从胎牛耳部分离培养了胎牛成纤维细胞。应用PCR方法鉴别了细胞的性别。选择雌性成纤维细胞,进行了形态观察、生长曲线测定、染色体分析。结果表明,分离培养的细胞具有正常的大小、形态、分裂增殖特性和染色体数目。胎牛成纤维细胞的培养方法的建立以及其相关的生物学特性的分析,有利于给同种和异种体细胞克隆牛研究提供形态良好、染色体数目正常的供体细胞,同时也为体细胞转基因等其他领域的研究提供了基础条件。  相似文献   

6.
重组碱性成纤维细胞生长因子ELISA检测方法的建立   总被引:2,自引:0,他引:2  
小鼠或家克经重组bFGF免疫后产生高滴度的抗血清,用此血清建立了间接ELISA检测方法,检测bFGF的灵敏度达10ng/ml.  相似文献   

7.
成纤维细胞生长因子9(fibroblast growth factor 9,FGF 9)最初发现于人类神经胶质瘤细胞,是成纤维细胞生长因子家族的成员之一,广泛分布于人体各种组织中,是一个在胚胎发育过程中以及成年后许多生物学功能所需的有效促进有丝分裂和细胞生长的因子。本文综述了FGF 9的基因特点以及研究现状。  相似文献   

8.
利用PCR克隆了大肠杆菌(Escherichia coli.)6-磷酸甘露糖异构酶(pmi)并进行了序列测定,序列分析表明,该片段与已经报道同源性为98.9%,推导的氨基酸序列与报道的同源性为100%.将该基因替换植物表达载体pCAMBIA130l中的潮霉素抗性基因,成功构建了以pmi为选择标记基因的植物表达载体pCAMBIA1301DP,为抗旱转基因育种奠定了物质基础.  相似文献   

9.
鸡胚成纤维细胞(CEF)是多种动物及人类病毒的易感细胞;也是研究鸡的基因组功能的理想材料.本试验的目的是研究非复制型腺病毒载体对CEF的转染效率及安全性;并建立在CEF细胞中进行RNAi的技术平台.采用GFP重组非复制型腺病毒载体(Ade-GFP)转染CEF细胞:结果证明0.1.2000 MOI Adv-GFP均可转染CEF细胞并表达GFP;转染后16h开始出现GFP阳性细胞:胞核与胞浆可见明亮的荧光:荧光细胞数量及荧光强度在24~36h达到高峰:以后逐渐衰减;约180h全部消失;转染效率最高为22.3%;形态学观察及流式细胞仪测定结果显示:Adv-GFP转染的CEF细胞未见细胞病变;多数转染组细胞活力不受影响:说明用Adv-GFP携带外源转染CEF细胞是安全可行的;用脂质体转染试剂转染化学合成的GFP-siRNA;成功地干涉了腺病毒载体介导的GFP基因在鸡胚成纤维细胞的表达:干涉效率为85%:证明了鸡胚成纤维细胞中存在RNAi机制:为进一步利用非复制型腺病毒载体递送siRNA在CEF细胞内进行RNAi的研究奠定了基础.  相似文献   

10.
采用单细胞培养法和组织块培养法从原代培养人胎儿成纤维细胞,并在不同体积分数胎牛血清(FBS)(0%、4%、8%、10%、12%)的条件下观察人胎儿成纤维细胞培养的状况并采用台盼蓝染色法进行活细胞计数.结果表明,早期由组织块培养法原代培养获取的细胞形态要比单细胞培养法原代培养获取的细胞稍好些,且在细胞传代后极少出现无法贴壁的死细胞.FBS对hFFs生长影响比较明显.在实际应用中,在体积分数8%FBS下,采用组织块培养法进行人胎儿成纤维细胞体外培养,效果良好.  相似文献   

11.
体内采用组织工程方法构建前交叉韧带种子细胞筛选研究,提供了一种理想的细胞标记的方法.体外分离培养兔皮肤成纤维细胞(SF),比较皮肤成纤维细胞使用荧光染料CM-DiI体外标记前后细胞的生长状态、增殖活性以及检测SF复合纤维生物蛋白胶植入前交叉韧带上12周后的荧光表达情况.结果表明CM-Dil标记SF效果良好,标记阳性率高于95%.而标记前后SF增殖活性无明显变化,荧光标记在体内实验12周后仍有表达.从而证实CM-DiI是筛选前交叉韧带组织工程种子细胞筛选研究中细胞标记、示踪的良好标记物.  相似文献   

12.
壳聚糖与胶原或海藻酸形成高分子离子复合物后,采用浇铸/冷冻干燥技术,制备了壳聚糖复合物海绵.表征不同组成复合物海绵的亲水性和形貌,发现加入胶原或海藻酸可增加海绵的吸水性和保水性,并有助于在海绵中形成大孔结构.海绵在pH7.4的磷酸盐缓冲液中用溶菌酶进行体外降解,复合物海绵的降解速率比单纯的壳聚糖海绵稍快.在海绵中进行人胎儿皮肤成纤维细胞的培养,发现细胞在复合物海绵中的生长增殖优于单纯的壳聚糖海绵,而且复合物海绵不会像单纯胶原海绵那样在细胞培养过程中发生降解收缩.此结果有望成为较理想的组织工程支架.  相似文献   

13.
研究葡萄籽提取物对人二倍体成纤维细胞寿命及原癌基因c—fos转录的影响,探讨葡萄籽抗衰老的细胞和分子基础.采用体外培养细胞、Northern杂交RNA电泳及细胞染色体常规检查的方法进行检测.葡萄籽提取物在体积分数为0.030%时,能有限地延长2BS细胞的寿命;葡萄籽提取物能诱导衰老2BS细胞c—fos基因的低水平转录.葡萄籽具有一定的延缓细胞衰老的作用,其对衰老2BS细胞c—fos基因转录的诱导作用,可能是延缓细胞衰老的分子机理之一.  相似文献   

14.
基因工程技术给人类社会和经济的发展带来了无限的希望和财富,但该技术中使用选择标记基因对生态、环境、非靶标生物等可能带来的危害等安全性问题,已倍受人们的关注和成为学者们研究、讨论的热点。文章综述了作为世界主要粮食作物-小麦转基因研究中应用获得无选择标记基因的遗传转化系统的研究现状,重点介绍无标记基因直接转化、基因枪法介导的共转化剔除选择标记基因、利用转座子介导的再定位剔除选择标记基因、位点特异性重组剔除性选择标记基因,并比较了它们的优缺点,展望了获得无选择标记技术的前景。  相似文献   

15.
实验动物模型是研究人类疾病的重要手段和工具。人类的许多疾病表现为数量性状,利用人类本身很难找到控制这些数量性状的遗传位点,鼠却能弥补这一不足。鼠以其繁殖性能好、生长快、世代间隔短,而且其基因组与人类具有较高的同源性等特点,使其逐渐成为研究控制人类疾病数量性状基因座(QTL)的模式动物。科学家们已经在小鼠中监测到酒精敏感、糖尿病、自身免疫、肥胖等疾病相关的数量性状位点。  相似文献   

16.
目的利用基因工程技术克隆人组织纤溶酶原激活物(t—PA)基因并构建一种能高效、安全表达t—PA的pEGFP—N3-t—PA真核表达重组质粒,为进一步研制转基因动物奠定基础.方法采用高效Trizol试剂快速从黑色素瘤细胞中提取总RNA,RT—PCR获得t—PAcDNA,并将真核表达质粒pEGFP—N3和t—PA基因片段分别双酶切,将回收的pEGFP—N3大片段(4.7kb)与t—PA基因片段(1.1kb)重组.对pEGFP—N3-t—PA质粒进行酶切鉴定和基因测序鉴定.脂质体介导pEGFP—N3-t—PA转染成纤维细胞(NIn313),并用RT—PCR法从mRNA水平检测t—PA的表达情况,用倒置荧光显微镜检测、分析其在NH 3T3细胞中的表达.结果成功地从黑色素瘤细胞中克隆了t—PA基因,并构建了以pEGFP—N3为载体的真核表达质粒载体,并能在真核细胞中表达、分泌t—PA.结论含t—PA基因真核表达质粒构建成功.  相似文献   

17.
作物育种就是不断发掘创造变异并选择固定优良变异。常规育种是根据表型进行选择,不仅选择效率低,易受环境影响,且易使品种的遗传基础单一化,培育突破性品种的难度加大。分子标记辅助选择(Molecular—marker assisted Selection,MAS)是依据与目标基因紧密连锁的分子标记对目标性状进行间接选择,实现了从表现型选择到基因型选择的根本转变,从而在作物育种中显示出了其独特的优越性,  相似文献   

18.
提高油酸的相对含量,增加油酸 /亚油酸(O/ L)的比值,已成为目前油料作物品质改良的重要内容.ahFAD2B是编码花生微粒体ω 6-脂肪酸脱氢酶的主要基因,根据双链RNA介导的基因沉默原理,设计和构建了可以抑制花生种子油酸脱氢酶基因ahFAD2B表达的载体,从而提高了油酸的含量,改善了花生油脂肪酸的组成.进一步将该构建组装到一个双右侧边界(DRB)的共转化载体中,用该载体来转化花生,以期从转基因后代中筛选无抗生素标记基因的高油酸花生材料.  相似文献   

19.
多基因植物表达载体用于植物遗传转化是培育具有多种优良品质作物的有效策略. 双T-DNA系统是实现筛选完成后选择标记基因删除的一种简便可行的方式. 为培育高度抗逆或去除标记基因的农作物,构建了多基因双T-DNA植物表达载体2T-bbgdD,其中含有一个抗除草剂基因bar, 3个抗逆相关基因(DREB1A, Na+依赖性Pi转运体基因(d5), betA)和一个报告基因gfp. 利用农杆菌介导法将该载体转入拟南芥,获得了多基因共转化及去除标记基因的转基因拟南芥. 可将此植物表达载体进一步用于作物的遗传转化.  相似文献   

20.
探讨1,25双羟维生素D3对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.以体外培养的人瘢痕成纤维细胞为实验模型,将1,25双羟维生素D31nmol/L、0.1nmol/L、0.01nmol/L加入细胞培养液中进行干预并与乙醇对照组比较,用乳酸脱氢酶实验检测药物的细胞毒性,并通过MTT实验和羟脯氨酸测定实验分别检测药物对成纤维细胞增殖活性和胶原合成的影响.0.1nmol/L、1nmol/L的1,25双羟维生素D3组对成纤维细胞的生长有抑制作用,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),0.01nmol/L、0.1nmol/L、1nmol/L的1,25双羟维生素D3对瘢痕成纤维细胞胶原合成具有抑制作用(P<0.01),并呈剂量依赖关系.1,25双羟维生素D3在体外对瘢痕成纤维细胞细胞增殖和胶原合成具有抑制作用.  相似文献   

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