共查询到17条相似文献,搜索用时 109 毫秒
1.
非特异性PCR产物的分离和扩增 总被引:1,自引:1,他引:0
在PCR(polymerase chain reaction)扩增产物的非特异性电泳带位置上及弥散状背景的一定间隔位置上,分别以切胶分离相应分子量的DNA分子作为模板,用产生这些非特异性DNA分子的一种引物在通用PCR条件下进行PCR扩增,仅在切胶的相应位置出现DNA分子量同样大小的电泳条带。阐述了这种模板DNA分子形成和出现非特异性电泳带与弥散状背景之间的关系。 相似文献
2.
3.
单引物PCR扩增DNA指纹图谱的稳定性研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以人胶原蛋白基因下游一段DNA的互补序列设计引物,对人染色体DNA进行单引物PCR扩增,在低温退火的条件下,这种引物与DNA模板的一处完全配对,并且可以随机地结合在其他一些位置上。由此进行单引物PCR扩增,它们的扩增产物形成了稳定的引物-模板特异的DNA指纹图谱。本文所建立的单引物PCR扩增技术在类似的研究中均可获得稳定的实验结果,具有一定的应用价值。 相似文献
4.
用荧光双链引物特异扩增并定量核酸 总被引:1,自引:1,他引:1
描述了一种利用特殊的双链引物--突触引物,用于核酸扩增的特异定量检测,在传统的引物的5'端标记荧光物质,而在引物的互补序列的3'端标记荧光淬灭剂以封闭其延伸。二者杂交即成双链突触引物。在制备PCR反应混合物阶段以及加热的初期,突触引物保持稳定的双链结构而不能引导扩增,在退火阶段,突触引物部分解链导致引物延伸,荧光物质与淬灭剂分开而产生荧光。利用人β珠蛋白基因对此方法进行了验证。这种可自行退火的荧光引物不仅简单地实现了实时扩增,同时比常规的热启动PCR更有效地提高了扩增的特异性。 相似文献
5.
根据NCBI上的DNA拓扑异构酶Ⅱ基因序列设计兼并引物,采用常规PCR、降落PCR、巢式PCR三种方法扩增糙皮侧耳和阿魏侧耳的拓扑异构酶Ⅱ部分基因序列,比较三种方法扩增效果的特异性、灵敏度.结果表明,巢式PCR的灵敏度和特异性都优于常规PCR和降落PCR,并且巢式PCR的灵敏度是常规PCR灵敏度的100倍以上,更加适合兼并引物扩增.这对利用兼并引物获取特异基因具有指导意义. 相似文献
6.
不同试验PCR反应的条件是不完全一致的,在PCR反应进行前就有必要对反应条件进行筛选和优化,因此,提出了对关键实验条件的正交筛选,结合反应的增强与抑制条件,从而筛选出适用于本实验室的最佳反应条件。 相似文献
7.
介绍了一种增加连接效率的PCR产物克隆技术,即SmaⅠ内切酶参与的PCR产物与SmaⅠ酶切的载体的连接;并通过克隆黄鲜基因组中一段约250bp的PCR产物的实例证实了该技术的可靠有效性。 相似文献
8.
以志贺氏菌ipaH基因特异序列为靶序列,设计RNA-DNA组合引物和链终止序列,优化反应体系,建立实时荧光单引物等温扩增检测志贺氏菌的方法,反应时间为44min。通过对4株不同群志贺氏菌和12株其他食源性致病菌进行实时荧光单引物等温扩增检测,结果表明,除4株志贺氏菌外,其他细菌均未扩增出荧光曲线。进一步研究表明,采用普通热裂解法提取DNA,实时荧光检测福氏志贺氏菌DNA的灵敏度为1.16fg/μL,纯培养菌液的灵敏度为1.3CFU/mL;对牛奶模拟样品中福氏志贺氏菌的检出限是1.8CFU/mL。研究结果表明,实时荧光单引物等温扩增检测志贺氏菌灵敏度高、特异性强、耗时短、方法简便。 相似文献
9.
石蒜单染色体的显微分离及体外扩增 总被引:2,自引:0,他引:2
建立了石蒜单染色体的分离及体外扩增的方法。石蒜根尖经卡诺固定液固定后,再用果胶酶和纤维素酶酶解处理,制得标本,在倒置显微镜下,用自制的毛细管针挑取目的的染色体。将分离的石蒜染色体放入0.2mLEppedorf管中,经蛋白酶K处理后,进行DOP-PCR扩增,获得DNA片段。琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物的长度大约为100-5000bp。此法为构建石蒜单染色体基因组库和筛选其特异性探针奠定了基础。 相似文献
10.
草鱼基因组随机扩增多态性引物及多态性位点的筛选 总被引:4,自引:0,他引:4
为了建立草鱼基因组DNA多态性分析的指标体系,应用RAPD技术,从180条10碱基随机引物中筛选出了31条能扩增出多态性DNA片段的引物。用这31条多态性引物共扩增出了327条重复性好、带型清晰、分辨率高的谱带。扩增产物的片段大小范围在400—2000bp之间。单一引物扩增条带为5—14条。用这些多态性引物在草鱼基因组DNA中检测到了93个多态性位点,并对这些多态性位点上的等位基因频率进行了统计分析。这31条多态性引物和所检测到的93个多态性位点初步为草鱼基因组的多态性分析提供了可靠的分析指标体系。 相似文献
11.
用DNA合成仪合成了分别带有PstI位点和SalI位点及终止密码子的2个用于扩增hIGF-1cDNA的PCR引物.利用合成的引物,700bp长的hIGF-1cDNA模板和Taq聚合酶进行PCR扩增.扩增产物经电泳鉴定后克隆进M13mp18载体,进行核苷酸序列分析.结果显示:PCR产物含已发表的hIGF-1成熟蛋白的编码序列和5'端的PStI位点及3'端的SaiI位点及终止密码TAG.用加端PCR技术成功地扩增和改造了hIGF-1的编码序列. 相似文献
12.
PCR扩增人外周血淋巴细胞抗体基因的探讨 总被引:1,自引:0,他引:1
采用RT-PCR法,以一组人抗体重链和轻链简并引物,直接从人外周血混合淋巴细胞中扩增出抗体重链Fd和κ轻链基因.结果提示:用Trizol试剂提取细胞总RNA,以Olig(dT)引导合成cDNA第一链,再经PCR扩增的方法,是值得优先采用的方法.细胞总RNA的提取不必追求高纯度,少量外周血即足以满足构建抗体库所需,简并引物可获得良好的扩增效果,为构建噬菌体抗体库奠定了基础 相似文献
13.
通过比较几个已知HSP70的cDNA顺序,用PCGENE软件中的PCRPLAN程序设计出一对简并引物,然后从水稻(广陆矮4号)总DNA中扩增出HSP70的基因片段并将其克隆到pBLUESCRIPT载体中。在完成了对克隆的序列测定之后,用PCGENE中有关程序对其进行同源分析,并对其他已知的HSP70作了一些分类及分子进化方面的探讨。 相似文献
14.
人野生型抑癌基因PTEN的逆转录PCR法克隆及序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
以正常人胎盘组织总RNA为模板,通过优化引物和PCR条件,采用逆转录PCR法扩增出人野生型PTEN基因cDNA片段,并克隆到pMD18-T载体,获得重组子pMD-PTEN.序列分析表明,该cDNA长1212 bp,与GenBank中PTEN基因序列相比有3个碱基发生了变化,但全部为同义突变,证实获得了人野生型抑癌基因PTEN的cDNA克隆,为进一步构建原核表达载体及研究PTEN蛋白的抑癌效果、抑癌机理打下基础. 相似文献
15.
目的:为提高PCR检测乙型肝炎病毒(HBV)的特异性和灵敏度,降低成本,对PCR条件进行优化.方法:将HBV特异性基因片段转化到大肠杆菌DH5α中,提取质粒,利用PCR扩增HBV C区基因,对PCR条件中的退火温度、Mg2 浓度进行优化,并比较3种不同Taq DNA聚合酶的灵敏度.结果:HBV C区基因扩增的最佳退火温度为58℃,最佳Mg2 浓度为1.5mmol/L,Biostar Taq DNA聚合酶扩增到10-6.讨论:对HBV C区基因进行了转化和PCR实验条件的优化,为扩大PCR在乙型肝炎病毒(HBV)检测领域中的应用提供实验依据. 相似文献
16.
大肠杆菌质粒DNA不同提取方法的比较 总被引:4,自引:0,他引:4
实验采用简化的碱法少量提取法、简便快速的煮沸法及试剂盒法提取质粒 p CB30 2 -3.并通过一对特异引物对质粒 DNA进行 PCR(聚合酶链式反应 )扩增 ,分别对各种方法所提取的质粒 DNA及其 PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析 ,结果表明碱法少量提取法和试剂盒法所提取的质粒 DNA纯度和产量高 ,且重复性好 ,达到了分子生物学实验要求 .其中简化的碱法少量提取法具有结果稳定和经济的特点 ,非常适合大多数实验室使用 . 相似文献
17.
荧光引物扩增AMG基因鉴定古代人骨遗骸的性别 总被引:4,自引:4,他引:0
建立一种用荧光标记引物扩增AMG基因的性染色体同源片段方法, 对古代人骨遗骸进行性别鉴定. 用其测定5个古代遗骸的性别, 其结果与形态学结果一致. 相似文献