| CRISPR-Cas9系统定向编辑TCR基因的sgRNA筛选 |
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| 引用本文： | 邵红伟,陈辉,彭鑫,徐畅,张广献,黄树林.CRISPR-Cas9系统定向编辑TCR基因的sgRNA筛选[J].集美大学学报(自然科学版),2015(4). |
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| 作者姓名： | 邵红伟 陈辉 彭鑫 徐畅 张广献 黄树林 |
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| 作者单位： | 1. 广东药学院生命科学与生物制药学院，广东 广州510006; 广东省生物技术候选药物研究重点实验室，广东 广州510006
2. 广州中医药大学基础医学院,广东 广州,510006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 为构建靶向T细胞抗原受体(T Cell Receptor,TCR)基因的CRISPR-Cas9基因组编辑系统,基于p X458质粒构建靶向TCR基因β链C区的CRISPR-Cas-sgRNA质粒,将其转染Hep G2细胞系,用流式细胞术检测转染效率;转染48 h后提取Hep G2细胞基因组DNA,扩增含有编辑位点的片段,测序分析该片段的峰图改变;对出现双峰的扩增片段做T-A克隆后测序分析,确定基因编辑发生的位置,并结合转染效率计算基因编辑效率.结果表明,成功构建含有3种sgRNA序列(N1、N2、S1)的p X458-sgRNA质粒,其转染效率分别为38.5%(N1)、39.7%(N2)和24.2%(S1);基因组PCR产物测序分析发现,S1组扩增片段在打靶位置出现杂峰;T-A克隆测序发现,20克隆有4个发生了基因编辑(20%),结合转染效率(24.2%)可知,编辑效率约为83%.可见,本文成功构建靶向TCR基因的CRISPR-CassgRNA质粒,并鉴定出基因编辑效率较高的一种sgRNA序列.
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| 关 键 词： | T细胞抗原受体 靶向 CRISPR 基因组 编辑 |
Selection of sgRNA for Efficient Editing of TCR Gene by CRISPR-Cas9 System |
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| SHAO Hong-wei,CHEN Hui,PENG Xin,XU Chang,ZHANG Guang-xian,HUANG Shu-lin.Selection of sgRNA for Efficient Editing of TCR Gene by CRISPR-Cas9 System[J].the Editorial Board of Jimei University(Natural Science),2015(4). |
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| Authors: | SHAO Hong-wei CHEN Hui PENG Xin XU Chang ZHANG Guang-xian HUANG Shu-lin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | TCR targeting clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR) genome editing |
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