| 树干毕赤酵母木糖还原酶Lysine270定点突变的理性设计 |
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| 引用本文： | 曾琦锴,林影,翟志臣,林小琼,杜红丽.树干毕赤酵母木糖还原酶Lysine270定点突变的理性设计[J].华南理工大学学报(自然科学版),2009,37(6). |
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| 作者姓名： | 曾琦锴 林影 翟志臣 林小琼 杜红丽 |
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| 作者单位： | 华南理工大学,生物科学与工程学院,广东,广州,510006 |
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| 摘 要： | Lysine270是树干毕赤酵母木糖还原酶(PsXR)与还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)形成结合口袋的关键氨基酸之一.为研究该位点对PsXR辅酶偏好性的影响,用其它19种氨基酸替代Lysine270,构建19种不同的木糖还原酶(XR)突变子,利用同源建模和分子对接的方法评价不同突变子与NAD+或NADP+之间的相互作用,并从中选择突变子K270R和K270N进行实验验证.突变基因及野生基因用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(IPTG)在大肠杆菌内进行诱导表达,经纯化后进行酶学性质研究.结果发现:K270R突变使得XR与NADP+的结合能力降低,米氏常数Km由0.025mmol/L升高到0.050mmol/L;K270N突变使得XR与NADP+不能结合.实验结果亦证实,通过理性选择得到的K270N突变子的辅酶依赖性由NADPH完全逆转为NADH.
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| 关 键 词： | 木糖还原酶 定点突变 辅酶偏好性 生物信息学 |
Rational Design of Site-Directed Mutagenesis of Lysine270 in Pichia stipitis Xylose Reductase |
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| Zeng Qi-kai,Lin Ying,Zhai Zhi-chen,Lin Xiao-qiong,Du Hong-li.Rational Design of Site-Directed Mutagenesis of Lysine270 in Pichia stipitis Xylose Reductase[J].Journal of South China University of Technology(Natural Science Edition),2009,37(6). |
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| Authors: | Zeng Qi-kai Lin Ying Zhai Zhi-chen Lin Xiao-qiong Du Hong-li |
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