| Bst DNA聚合酶的纯化及等温扩增检测体系的构建 |
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| 引用本文： | 谭拥军,吴莎莎,谭桂湘,向勤.Bst DNA聚合酶的纯化及等温扩增检测体系的构建[J].湖南大学学报(自然科学版),2019,46(12):98-106. |
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| 作者姓名： | 谭拥军 吴莎莎 谭桂湘 向勤 |
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| 作者单位： | 湖南大学生物学院,湖南长沙,410082 |
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| 摘 要： | Bst DNA聚合酶是等温扩增反应中的一个关键酶,但由于专利限制,目前国内实验室所使用的Bst DNA聚合酶大多需要从国外进口,价格昂贵且长途运输影响酶活性,因此亟需自主生产出Bst DNA聚合酶应用于等温扩增检测技术.通过构建Bst Fragement的原核表达质粒,采用原核蛋白表达系统和His-Tag亲和纯化手段,制备成本低,活性高,特异性强的Bst DNA聚合酶.同时,针对特定的模板,对自制Bst DNA聚合酶的扩增反应进行了进一步优化,用不同的产物鉴定方法对扩增效果进行检测,并最终筛选出该酶最优的扩增反应条件为60 mM K+、30 mM(NH4)2SO4、pH为9.0.最后,验证了Bst DNA聚合酶能用于快速准确检测肺炎支原体、肺炎衣原体,降低了相关病原体核酸检测的成本,为之后核酸检测在基层医疗的更广泛应用提供了条件.
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| 关 键 词： | BstDNA聚合酶 重组蛋白 扩增 核酸检测 |
Purification of Bst DNA Polymerase and
Construction of Isothermal Amplification Detection System |
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| TAN Yongjun,WU Shash,TAN Guixiang,XIANG Qin.Purification of Bst DNA Polymerase and
Construction of Isothermal Amplification Detection System[J].Journal of Hunan University(Naturnal Science),2019,46(12):98-106. |
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| Authors: | TAN Yongjun WU Shash TAN Guixiang XIANG Qin |
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