番茄基因转化研究初报

番茄子叶及下胚轴切段能被含ｎｐｔ－Ⅱ基因和ｍｔｌＤ基因的根癌农杆菌感染，目前已获Ｋａｎ￣ｒ的愈伤组织     

地黄毛状根的培养研究

发根农杆菌是一种革兰氏阴性菌,能侵染大多数的双子叶植物,诱发被感染植物的受伤部位长出毛状根.本实验用发根农杆菌感染地黄外植体诱导其产生毛状根,并加以培养,为今后选择合适的培养方式,大规模培养毛状根来生产地黄的次生物质奠定基础.     

两种遗传标记筛选物在马铃薯Desiree遗传转化应用中的研究

以马铃薯茎段为外植体,采用农杆菌介导法,将带有Bar和hpt基因的植物表达质粒载体转入马铃薯栽培品种Desiree,并对遗传转化过程中的预培养时间、抑菌素浓度、筛选物抗除草剂Basta和潮霉素的浓度等因素进行了研究.结果表明:预培养时间2 d转化效率最高;头孢霉素浓度为300 mg/L时,能够有效的抑制农杆菌的生长;以除草剂Basta为筛选物时,适宜的筛选压为0.6 mg/L,用潮霉素(Hyg)作为筛选物时,以15 mg/L为最合适;获得的转基因植株经PCR分析,证实Bar基因己经整合到马铃薯基因组DNA中,从而建立了以除草剂Basta或以潮霉素为遗传标记筛选物的马铃薯栽培品种Desiree的遗传转化体系,为利用基因工程进一步改良马铃薯品质奠定了基础.     

农杆菌介导的八氢番茄红素合酶基因转入人参愈伤组织影响因素

以PSY为目的基因,应用根癌农杆菌介导法对人参愈伤组织进行遗传转化,从菌液浓度、侵染胞龄、侵染时间、共培养时间四方面优化了遗传转化体系。经PCR分析鉴定初步证明,外源基因PSY已整合到人参的基因组中。     

水稻碱性几丁质酶基因表达载体pCAMBIA1301-RC24的构建

用限制性内切酶Kpn1从质粒pYA024中切出大小约2．75kb的片段,此片段包含Actin1启动子、NOS终止子、水稻几丁质酶基因．将其插入到表达载体pCAMBIA1301-imp的多克隆位点内,构建成了水稻碱性几丁质酶基因的表达载体．利用液氮冻融法将构建好的表达载体导入发根农杆菌LBA4404中,以用于生物工程下游技术研究．     

Resistance to rice blast (Pyricularia oryzae) caused by the expression of trichosanthin gene in transgenic rice plants transferred through agrobacterium method

The gene of trichosanthin has been transferred into rice plants through agrobacterium method. The single copy insertion and the expression of foreign gene have been proved in regenerated plants. In antifungal assay the degrees of rice blast (Pyricularia oryzae) infection of the transgenic plants expressing trichosanthin and expressingGUS gene as control have been evaluated. The differences such as the time of disease symptom observed, the number of infected plants and damaged leaves, the growth of infected plants of the two transgenic plants after being inoculated by rice blast (Pyricularia oryzae) are significant. The transgenic plants with trichosanthin gene grew faster than the plants withGUS gene, even when humidity environment was removed. The results show that the transgenic plants that expressed trichosanthin are able to delay the infection of rice blast compared with the plants as control. In addition, no damage caused by the expression of trichosanthin gene in transgenic plants has been observed.     

柚子转化的研究

本文报道一个简便的转化实验。柚子能被含Ti质粒的农杆菌感染。Ti质粒带有一个npt-Ⅱ基因和一个胭脂碱合成酶基因。卡那霉素抗性绿苗经NPT-Ⅱ酶活性测定和DNA分子杂交试验证明外源基因己导入柚子。     

尾巨桉遗传转化系统建立的研究

以建立的尾巨桉(Eucalyptus urophylla×grandis)3226、3228无性系高频再生体系为基础，利用GUS染色组织分析法研究了预培养时间、侵染时间和共培养时间因素对尾巨桉茎段遗传转化的影响，探讨了适宜尾巨桉转化的卡那霉素与抑菌抗生素使用浓度.结果表明，较优的转化条件是:茎段外植体不需进行预培养而直接进行侵染（菌液浓度OD600值为0.5）3 min，共培养2 d，然后转移到含75 mg／L卡那霉素和300 mg／L头孢噻肟钠的筛选培养基上，进行转化植株的再生.3226、3228     

农杆菌介导的花生遗传转化体系的初步研究

应用花生胚小叶再生体系,以农杆菌介导法对质粒上的基因转化进行初步探讨.通过对影响基因转化的各因素,如抗生素的筛选压、共培养时间、AS的影响、及外植体取材方式等进行研究,结果发现:外植体与农杆菌在加有AS(100μmol/L)的改良MS液体培养基中共培养4 d后,先进行10 d的恢复培养,继而转入加有Hy(25 mg/L)和Cef(200 mg/L)的抗性筛选培养基中进行筛选培养40～50 d,后转入含Hy(20 mg/L)的分化培养基中分化,3个月后在首批材料中得到6个再生植株,经PCR检测,有1株显示了800 bp的GUS基因核酸片段,初步证实了此转化体系合理有效.     

农杆菌介导的唐菖蒲遗传转化体系的建立

在唐菖蒲‘Advanced Red’胚性愈伤组织受体系统的基础上,建立其遗传转化体系。采用根癌农杆菌（GV3101）介导法,研究了侵染液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮（AS）浓度、负压和筛选方式等因子对唐菖蒲遗传转化效率的影响。结果表明：在遗传转化过程中,不经预培养,负压处理下,农杆菌菌液OD600为0.6～0.8,侵染时间15～20min,添加100μmol/L AS,共培养3d,可获得较高的遗传转化效率。经过3～4个月选择培养,部分抗性植株经PCR和Southern杂交检测表明,目的基因gus已整合到唐菖蒲基因组中。