脊髓灰质炎病毒I型单克隆抗体的制备

目的: 为建立脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体．方法:以Vero细胞增殖病毒并用蔗糖密度梯度离心法纯化后,用病毒免疫SPF级Balb/c小鼠．取小鼠免疫脾淋巴细胞与SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过间接 ELISA 法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞,并用有限稀释法克隆化．用细胞培养法制备脊灰病毒单抗,并以中和试验测定单抗效价．结果:获得了8株分泌抗脊灰病毒Sabin株I型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中1株G8G7能够稳定分泌抗体．间接ELISA 法测得单抗的效价为1∶8,中和试验测得中和抗体的效价为1∶58．结论:G8G7分泌的抗体为抗脊灰病毒Sabin株I型特异的单克隆抗体.     

雪上一枝蒿体内外毒性研究

为观察雪上一枝蒿不同部位提取物的体内外毒性,以MTT法测定了药物在体外对Vero猴肾细胞的毒性作用,以小鼠急性毒性试验测定了药物对小鼠的口服半数致死量(LD₅₀).结果表明：雪上一枝蒿各提取部位对Vero细胞有不同程度的毒性作用,药物浓度为500 μg/mL时,氯仿、石油醚、正丁醇和乙酸乙酯提取物对体外培养24 h的细胞增殖抑制率分别为63.9%, 69.7%, 32.9%和18.2%.氯仿部位、石油醚部位、正丁醇部位对小鼠的经口LD₅₀分别为37.991 mg/kg、6766.928 mg/kg、5492.337mg/kg.     

接种密度对Vero细胞在微载体表面生长的影响

研究了接种密度对Ｖｅｒｏ细胞在微载体表面生长行为的影响,发现培养过程中所获得的细胞最高密度随接种密度的增加而有所提高,当细胞的表面接种密度高于１．０×１０＾５ｃｅｌｌｓ／ｍｇＭＣ时,因贴壁后细胞扩展受到限制而不利于进入对数生长期。就整个Ｖｅｒｏ细胞培养过程,适宜的表面接种密度为３×１０＾－４－７×１０＾４ｃｅｌｌｓ／ｍｇＭＣ,此时可以获得较高的比生长速率和细胞增殖倍数。     

BV、HSV-1、HSV-2在Vero细胞上增殖的比较研究

为进一步证实1997年本实验室从我国猕猴群中分离的B病毒(BV)与人单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、2型(HSV-2)之间的关系,在Vero细胞上对3种病毒的增殖规律及引起的细胞病变进行了比较研究.结果表明新分离BV与HSV-1、HSV-2引起的细胞病变不同,BV主要见细胞融合;病变发展速度不同,BV介于两者之间;对抗BV血清呈不同程度的交叉反应,HSV-1最高仅达70%左右.说明目前国内一直沿用的用HSV-1抗原替代BV抗原检测B病毒抗体的方法,确有漏检的可能.     

大肠杆菌内毒素对Vero细胞培养的作用研究

将精制大肠杆菌内毒素(E.COliEndotoxin)加入含血清细胞培养液(MEM)中,配制成浓度分别为50、100、200、500EU/mL的细胞培养液 用此培养液对Vero细胞进行培养,测定细胞生长曲线、细胞平均倍增时间、最大增殖浓度及台盼蓝拒染率等指标,研究大肠杆菌内毒素对非洲绿猴肾细胞(Vero)培养的影响 结果显示,内毒素含量为50EU/mL时,Vero细胞仍能正常生长 当内毒素含量逐渐升高,培养时间逐渐延长时,细胞的增殖速度及活率明显下降 这表明,内毒素对Vero细胞的生长及活性具有明显的抑制作用,且该作用具有一定的时间、剂量依赖性     

大孔明胶微载体的制备

以明胶为原料，用悬浮成球、甲苯制孔的方法制备大孔明胶微载体。考察了表面活性剂及其配比、油水比、明胶浓度、制备方式和表面修饰等对载体性能的影响。优化了制备大孔明胶微载体的条件，制得了直径为１００－３００μｍ，孔径为１０－３０μｍ的大孔明胶微载体。     

微囊藻毒素对Hela细胞和Vero细胞的毒性效应

ＭＣＹＳＴ－ＬＲ,ＭＣＹＳＴ－ＲＲ,ＭＣＹＳＴ－ＹＲ稀释后的毒素溶液处理Ｈｅｌａ细胞和Ｖｅｒｏ细胞后得到如下结果：１．３种毒素溶液对培养的Ｈｅｌａ细胞均有明显的抑制作用和毒性作用,其毒性作用与浓度成正比,致死细胞边缘不整齐不规则,细胞呈脱水状态。倒置显微镜下可见细胞变黑无折光性。高浓度毒素溶液（包括ＭＣＹＳＴ－ＬＲ,ＲＲ和ＹＲ３个样品）作用细胞２４ｈ后,细胞完全致死脱落,３个样品间无明显差别;２．     

生物反应罐Vero细胞微载体灌流培养

用7L生物反应罐,3g/L Cytoedx 1,φ＝50％溶解氧,40－50r/min搅拌速度进行细胞培养,培养48h开始灌流。连续动态测定葡萄糖含量、渗透压变化及pH值,同时观察细胞形态、增殖情况。连续3批7L规模灌流培养表明,细胞贴附率高,增殖速度快,细胞形态良好,细胞群体倍增数达4．7。结果表明生物反应罐灌流培养法是一种快速、规模化制备细胞的有效方法。     

Vero细胞培养过程中球转球接种工艺的可行性研究II.静态球转球过程

研究了静态球转球接种Ｖｅｒｏ 细胞培养过程中的细胞生长特性,提出了细胞球转球的机理,通过与消化接种的比较,证明在静态球转球接种的细胞培养过程中,细胞在新球与老球表面的生长和细胞的生理状态很不平衡,因而认为不适合于大规模细胞培养过程,并对消化接种在大规模操作中的可行性进行了讨论     

用大孔明胶微载体培养Vero细胞

用自制在孔明胶微载体与实心微载体ＣＴ－３在转瓶中培养Ｖｅｒｏ细胞，在培养后期许多细胞从ＣＴ－３上胶落下来，细胞密度降低，而大孔微载体上的细胞密度一直保护在较高水平（８×１０＾８ｃｅｌｌｓ／Ｌ以上），表明大孔微载体能够延长细胞活性期，用大孔明胶微载全反应器中培养Ｖｅｒｏ细胞，最大活细胞密度达５．６×１０＾９ｃｅｌｌｓ／Ｌ。