浅谈多功能酶

多功能酶是指具有一种以上催化活性的酶，不同的活性中心可位于同一多肽链的不同部位，也可位于不同的亚基上。     

一种新型高分子量麦谷蛋白亚基的鉴定及其与同源蛋白间氨基酸序列的差异

粗山羊草（Aegilops tauschii）是普通小麦（Triticum aestivum）D染色体组的祖先供体种，粗山羊草的Glu-ID^t位点所编码的高分子量麦谷蛋白亚基的类型较普通小麦Glu-1D位点所编码的种类更丰富，从粗山羊草中筛选到一个电泳迁移率比普通小麦Dy12更快的亚基Dy13^t，对Dy^t亚基基因的全长编码区进行了DNA序列测定后发现该亚基的编码区含624个密码子；由其决定的氨基酸序列的长度，在已知D染色体组编码的所有y型高分子量麦谷蛋白亚基中是最小的，因此认为Dy13^t是高分子量麦谷蛋白亚基的新成员，比较了Dy13^t与小麦族植物A，B，D，R染色体组所编码的y型高分子量麦谷蛋白亚基在氨基酸序列上的差异。     

亚洲黑熊活化素βA亚基基因克隆及分子进化分析

借鉴互联网中已克隆的活化素βA亚基基因的序列.设计并合成一对兼并引物,首次扩增和克隆到亚洲黑熊βA亚基基因的357 bp片段,以水作为阴性对照排除污染,多次重复实验获得一致稳定结果.序列分析显示此片段在处于不同进化程度的物种之间,仍然具有高度的保守性,亚洲黑熊βA亚基基因与人相比有29个核苷酸差异,一致性高达91.6%;与亲缘关系较近的大熊猫、小熊猫和马来熊相比,分别有4、20、3个核苷酸差异,一致性分别为98.9%、94.4%、99.2%.系统发育分析和酶切图谱分析显示亚洲黑熊、大熊猫和马来熊具有较近的亲缘关系,而它们与小熊猫的亲缘关系较远.     

恶性疟原虫DNA疫苗的初步研究

采用遗传工程技术克隆了编码含有恶性疟原虫子孢子期及红内期表位的基因片段，与霍乱毒素Ｂ（ＣＴＢ）亚基基因或白介素２（ＩＬ２）基因融合基因的重组质粒。将纯化的质粒免疫Ｂａｌ ｂ／ｃ纯系小鼠，３次免疫后诱导机体产生了体液免疫和细胞免疫，抗ＣＴＢ抗体滴度平均为１：１２８０，抗ＮＡＮＰ及抗ＡＷＴＥ抗体平均滴定为１：１０００，免疫的小鼠进行疟原虫子孢子攻击实验，保护率在５０％左右。     

鼠伤寒沙门工菌JL65色氨酸合酶trpB基因的克隆,测序和相关特性的研究

用ＰＣＲ方法从鼠伤寒沙门氏菌ＪＬ６５染色体ＤＮＡ中扩增了ｔｒｐＢ基因片段，克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ质粒上，并用双脱氧末端终止法测定了其核苷酸序列。ＪＬ６５ｔｒｐＢ基因和ＷＴＳ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ｔｒｐＢ基因作比较后，发现仅有３处的核苷酸差异，其中ｔｒｐＢ基因的１００位由Ｃ突变由Ａ，１１１位由Ｇ突变为Ａ，１０３０位由Ｇ突变为Ａ，导致３４位氨基酸残基Ａｒｇ变为Ｓｅｒ，３４４位的Ｇｌｙ变     

聚离子亚基化合物介导的基因转移方法可用于外源基因的瞬时表达

利用聚离子亚基化合物介导的基因转移方法，研究了外源β－半乳精苷酶报告基因的瞬时表达．结果表明聚离子亚基化合物介导的基因转移方法可用于外源基因的瞬时表达研究，而且在相同的条件下，用该方法在NIH3T3细胞和PA317细胞中对报告基因转移的效率要高于磷酸钙法和脂质体法．实验结果还表明聚离子亚基化合物的结构影响外源基因转移效率．     

β-伴大豆球蛋白中α、α′亚基对大豆分离蛋白薄膜微观结构和功能特性的影响

为了研究β-伴大豆球蛋白中不同亚基组成对大豆分离蛋白薄膜微观结构和功能特性的影响,采用东农47(Wild对照)、α亚基缺失型(α-lack)、α′亚基缺失型(α′-lack)以及α、α′双亚基缺失型[(α+α′)-lack]的大豆为原料提取大豆分离蛋白。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析4种大豆分离蛋白的亚基组成,采用溶液流延法制备不同亚基组成的大豆分离蛋白薄膜,探究不同亚基组成对薄膜流变行为、微观结构、机械强度、耐水性、屏障特性、热稳定性及光学性能的影响。结果表明,不同亚基组成对大豆分离蛋白膜的微观结构和功能特性均有不同影响,与α亚基缺失和α、α′双亚基缺失相比,α′亚基缺失对薄膜结构和功能特性影响最为明显。红外光谱分析结果显示,相较于Wild薄膜,α′亚基缺失加强了蛋白质分子间氢键的相互作用,α′-lack薄膜β折叠含量减少到27.84%,α螺旋和无规则卷曲含量增加到16.83%和13.84%。扫描电镜分析结果显示,α-lack和(α+α′)-lack薄膜纹理形貌较散乱疏松,而α′-lack薄膜无明显气泡且具有平整致密的网络结构。流变特性分析结果发现,α亚基缺失会降低成膜强度,而α′亚基缺失会明显提高膜液的G′,使α′-lack具有更好的潜在成膜能力。与其他3种薄膜相比,α′-lack薄膜具有最大的抗拉伸强度2.31 MPa,最小的水分含量(9.54%)和水溶性(30.81%),最低的水蒸气透过系数[21.89 g·mm/(d·m²·kPa)],表现出优异的热稳定性和可见光阻隔特性。α′亚基的缺失能显著改善大豆分离蛋白薄膜微观结构和功能特性,研究结果旨在为生产高成膜性大豆蛋白系列产品提供理论参考。     

钙调神经磷酸酶B亚基高表达条件及产业化研究

重组人CNB高表达大肠杆菌已由本室构建成功,摇瓶发酵液表达量可达100mg·L-1. 通过改进培养基配方及摇瓶表达工艺,使CNB在摇瓶发酵液中表达量达到500mg*L-1以上.在高表达量的基础上,又进行了产业化改进,以蒸馏水添加无机盐取代了原配方中的自来水,并提高了表达量.     

井冈霉亚基胺A高产突变株的构建

通过接合转移将一个带有阿泊拉抗性基因和双交换臂的穿梭质粒pJTU609导入井冈霉素高产菌株吸水链霉菌井冈变种(Streptomyces hygroscopicus var.jinganggensis)DX546中,将负责井冈霉素A生物合成最后一步糖基转移中的糖基转移酶基因valG置换突变,多聚酶链式反应结果显示valG被阿泊拉霉素抗性基因成功置换,通过高压液相色谱检测证实突变株的发酵产物中井冈霉亚基胺A的产量得到大幅提高.     

基于COI和D-Loop序列豫北虾虎鱼分子系统分析

虾虎鱼在河南省北部广泛分布,但其系统分类和多样性未有报道.从豫北原阳黄寺、安阳小南海、淇县淇河、长垣孙东闸、林州弓上水库等地采集虾虎鱼样本共计23尾,成都岷江样本6尾,分别扩增了线粒体COI基因和D-Loop序列.联合GenBank下载虾虎鱼的COI序列和D-Loop序列,构建了虾虎鱼的系统进化树.结果显示,采自黄寺、小南海、淇县、岷江地区的子陵吻虾虎鱼(Rhinogobius giurinus)聚为一个分支,而采自孙东闸和弓上水库的褐吻虾虎鱼(Rhinogobius brunneus)聚为一个单系群;这两种虾虎鱼遗传分化主要来自群体间.系统发育结果支持子陵吻虾虎鱼的韩国群体与中国群体构成姐妹群关系,中国不同地理种群间则相互交叉.