PDE4与cAMP信号区域化

第二信使cAMP在细胞信号转导中起着重要作用. 但为什么相同的cAMP信号可以诱导不同的生理反应. 20年前, cAMP信号区域化的提出, 似乎解答了这一疑惑. cAMP区域化使得空间上不同的蛋白激酶A (PKA)池能够被不同地活化. 同时也使得人们对cAMP通路复杂性和重要性有了新的认识, 使其再度成为生命科学的研究热点. cAMP/PKA信号转导区域化是由蛋白激酶A激酶锚定蛋白(AKAPs)和磷酸二酯酶(PDEs)来维持的, 前者可以结合PKA和其他的信号转导蛋白; 后者可以水解cAMP, 终止PKA活性. PDE4是PDEs同工酶超家族的成员之一, 不仅参与区域化的cAMP信号通路的调控, 而且还在整合与其他主要信号转导通路的反应网络中起重要作用. 本文对PDE4的分类、基因表达与调控、作用的系统与区域进行了回顾, 重点对PDE4作用的具体分子与机理以及PDE4发挥功能的调控方式进行了总结, 并结合本室的研究对PDE4在大鼠颗粒细胞成熟及cAMP信号区域化中的作用进行了综述.     

KP-10对绵羊卵泡颗粒细胞增殖及凋亡相关基因表达的作用研究

目的：探讨Kisspeptin-10(KP-10)对绵羊卵泡颗粒细胞(FGCs)CCND1、CDK6、Bcl-2、THBS1、TNC和Bax基因表达的影响.方法：将分离培养的原代FGCs细胞在含不同浓度(0、10、100和1 000 nmol/mL)KP-10培养基中培养，分别标记为CG组、EP-1组、EP-2组和EP-3组，采用CCK-8法检测FGCs的细胞活性，筛选出KP-10对FGCs增殖的最佳浓度与时间.采用RNA-seq技术进行转录组测序分析，应用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western Blot方法进行验证.结果：与CG组比较，48 h时EP-2组FGCs细胞活力极显著增强(P<0.01).转录组测序显示CG组和KP组间存在202个差异表达基因，其中上调基因119个，下调基因83个.qPCR和Western Blot结果表明，KP组CCND1、CDK6、Bcl-2基因表达显著上调(P<0.05);Bax、THBS1、TNC基因表达显著下调(P<0.01;P<0.05),与转录组测序结果基本一致.Western Blot验证结果与qPCR检测结果...     

镉对小鼠卵巢颗粒细胞DNA损伤及MDA、SOD影响的初步研究

目的 为探讨镉对雌性生殖机能的毒性影响.方法 取小鼠卵巢颗粒细胞运用单细胞凝胶电泳技术检测10、20 和40 mg/kg 体重的氯化镉攻毒48 h后颗粒细胞DNA的损伤情况,并测定其MDA的含量和SOD的活性.结果 镉对卵巢颗粒细胞DNA产生损伤作用,受损程度随镉剂量而升高,且MDA的含量升高,SOD的活性下降,具有明显的剂量效应关系,结论镉对卵巢颗粒细胞有毒性作用,能够损伤细胞DNA.     

颗粒细胞上的配体NPPC及其受体NPR2维持小鼠卵母细胞减数分裂的阻滞

哺乳动物卵泡中的颗粒细胞维持了卵母细胞处于减数分裂阻滞状态,这可以防止它们过早成熟。研究发现,位于卵泡壁上的颗粒细胞表达C-型钠肽(NPPC)的信使RNA;而卵母细胞周围的卵丘细胞表达NPPC受体NPR2的信使RNA,这是一个鸟苷酸环化酶。细胞培养实验显示,NPPC可增加卵丘细胞和卵母细胞中cGMP的表达水平,抑制了减数分裂的恢复。Nppc或Npr2突变小鼠,减数分裂阻滞将在大多数卵泡中不能持续,减数分裂得以提早恢复。卵母细胞源旁分泌因子可促使卵丘细胞表达Npr2的信使RNA。上述结果表明,颗粒细胞上的配体NPPC及其卵丘细胞上的受体NPR2协同防止了减数分裂的过早成熟,这对于成熟和排卵的协调以及对于雌性生殖都至关重要。     

水温对褶纹冠蚌血细胞含量的影响

本研究分别在10℃、15℃、20℃、27℃和30℃等5种水温下暂养褶纹冠蚌,每组蚌的数量为30只,暂养5d后对各组褶纹冠蚌的血细胞进行分类、计数并进行统计分析。结果发现,在15℃以下水温中暂养的褶纹冠蚌,其总血细胞含量随着温度的上升而下降,水温为15℃时其总血细胞含量最低,每毫升血淋巴中含血细胞的总数为（1．90±0．59）×10^6个;在15℃以上的3种水温中暂养的褶纹冠蚌,随着温度的升高,其总血细胞含量逐渐升高,水温为30℃时其总血细胞含量达到最高值,每毫升血淋巴中含血细胞的总数为（2．62±0．60）×10^6个。随着水温的不同,褶纹冠蚌血淋巴中的小颗粒细胞和透明细胞含量的变化与总血细胞含量的变化相似,而其中的大颗粒细胞和淋巴样细胞含量的变化与总血细胞含量的变化有所不同。     

卵巢内动脉血流搏动指数与卵子质量及卵泡发育的关系

目的:探讨卵巢内动脉血流搏动指数(PI)与卵子质量及卵泡发育的关系.方法:应用阴式彩色多普勒超声测定35例患者给予HCG日的卵巢内动脉血流搏动指数和穿刺取卵日的卵巢动脉血流搏动指数,获成熟卵率、卵泡液激素水平、颗粒细胞的凋亡率.结果:穿刺取卵日测得的PI与获成熟卵率成正相关(r=0.429,p=0.0126),和颗粒细胞的凋亡成负相关(r=-0.383,p=0.0278),和卵泡液的孕激素含量成负相关(r=-0.429,p=0.0126),仅给予HCG后PI与总获卵数成负相关(r=-0.393,p=0.0235).结论:穿刺取卵日的测到PI值与卵泡颗粒细胞凋亡及卵泡的发育成熟有显著相关性,可以作为衡量卵泡黄素化、氧化以及卵泡质量的一个很好的评估指标.     

栉孔扇贝（Chlamys farreri）血细胞类型及抗菌力的研究

用2种方法将栉孔扇贝血细胞分为2大类：透明细胞、颗粒细胞。吉姆萨染色观察，透明细胞的细胞质中颗粒很少，细胞核圆形，居中，细胞质较少，核质比大；颗粒细胞比透明细胞大且多，染色深，但核质比小，在细胞质中有颗粒，有些颗粒细胞具双核。密度梯度离心结果，透明细胞主要位于上层，颗粒细胞则大部分位于下层。吞噬力、抗菌活力、溶菌活力及活性氧检测结果表明，颗粒细胞均强于透明细胞。     

热应激对小鼠海马细胞构筑的影响

实验采用石蜡切片技术及尼氏染色法,探讨热应激对小鼠海马各区锥体细胞与颗粒细胞胞体形态结构及细胞数目的影响.结果显示:热应激组小鼠海马各区的锥体及颗粒细胞胞体面积较对照组均发生显著变化,其中热应激组海马CA3区锥体细胞胞体面积较对照组极显著变小(P颗粒细胞短轴的变化比长轴变化显著(P<0.05);尼氏染色后光镜下可见热应激组锥体与颗粒细胞排列欠整齐,极性差,胞体面积、体积缩小.细胞膜皱缩.结果表明热应激对小鼠海马各区细胞构筑产生显著影响,并且这种影响可能是热应激导致脑受损的病理基础.     

颗粒细胞的增殖分化及其在卵泡发育中的作用

颗粒细胞(GC)是卵巢中十分重要的细胞. 从原始卵泡生长启动、增殖、分化、闭锁/排卵到黄体形成, GC在形态、功能等方面都发生各种变化. 卵母细胞(OC)指导了GC的增殖、分化; 同时GC也影响OC的成熟. 有众多因子参与这个调节过程, 牵涉到复杂的分子作用机制和信号转导通路, 如p38 MAPK通路可选择性调控FSH对GC的甾体生成; 而转录因子LRH-1和DAX-1在该过程中可能发挥重要作用; FSH通过促进PCNA和StAR表达及甾体生成, 诱导GC的增殖和分化; 而ERK1/2通路的激活也可能参与FSH对GC增殖分化的诱导作用. 因此, GC是一个用以研究细胞增殖、分化和细胞相互作用及其信号转导通路和分子机制的十分理想的细胞模型. 本文评述了近几年国内外研究的最新进展.     

亚硝酸盐暴露小鼠不孕效应的实验性研究

对66只雌性且有阴栓的C57BL/6J小鼠(对照组)每日进行生理盐水灌胃处理,待幼仔娩出,统计不孕率.将对照组哺乳后且有阴栓的雌鼠随机平均分配,分别进行每天60mg/kg(低剂量亚硝酸盐组)和120mg/kg(高剂量亚硝酸盐组)的亚硝酸钠灌胃处理,待子鼠娩出,统计不孕率(第一轮暴露模型).按此方法,对第一轮暴露哺乳后且有阴栓的雌鼠进行第二轮亚硝酸钠暴露并统计不孕率.收集对照组和高剂量亚硝酸盐两轮暴露组雌鼠的卵巢,采用HE TUNEL试剂盒观察卵泡内颗粒细胞凋亡情况及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达情况,利用Western blot蛋白半定量分析法分析Caspase 8、c-fos蛋白在卵巢内的相对表达量.结果显示:亚硝酸盐暴露可致小鼠不孕且具有剂量依赖性(P<0.05,n=66);亚硝酸盐暴露可诱导机体产生氧化应激反应、可使卵泡内颗粒细胞iNOS表达增加、颗粒细胞凋亡增加(P<0.01,n=20).以上结果说明,亚硝酸盐有致不孕效应,可能与NO信号通路和氧化应激诱导的颗粒细胞凋亡和排卵抑制有关.