葡萄糖酸钙对肌苷发酵的影响

在肌苷的摇瓶发酵过程中,10g／L的葡萄糖酸钙适于肌苷的合成和菌体生长。初始培养基中加入10g／L的葡萄糖酸钙,能够诱导葡萄糖酸激酶的生成,大幅提高其比活,增大磷酸戊糖（HMP）途径的通量。肌苷的产率由10.76g／L提高到18.36g／L。     

ASI基因家族结构及表达分析

为研究编码α-淀粉酶/枯草杆菌蛋白酶抑制剂（α-amylase/subtilisin inhibitor, ASI）的基因结构特征及功能,本研究利用NCBI、Phytozome等平台工具鉴定到来源于23种植物的33个ASI基因家族成员,分析其进化特点及其编码蛋白的理化性质和保守基序等信息.同时结合RT-qPCR技术分析水稻ASI在干旱和盐胁迫条件下的表达模式.结果表明,ASI基因家族具有较高的保守性,但其编码蛋白上下游区域的保守性强弱不一,同时顺式作用元件预测结果提示ASI基因可能参与植物生长发育调控、响应生物及非生物胁迫等生理过程. RT-qPCR分析发现,较未胁迫条件下,幼苗期水稻的根、叶鞘和叶片等组织中RASI基因发生了不同的表达变化,提示ASI基因可能具有多样性的生物学功能.     

Biosynthesis of selenosubtilisin: A novel way to target selenium into the active site of subtilisin

Glutathione peroxidase （GPx, EC1.11.1.9）, an important anti-oxidative selenoenzyme, can catalyze the reduction of harmful hydroperoxides with concomitant glutathione, thereby protecting cells and other biological issues against oxidative damage. It captures considerable interest in redesign of its function for either the mechanism study or the pharmacological development as an antioxidant. In order to develop a general strategy for specifically targeting and operating selenium in active sites of enzymes, the catalytically essential residue selenocysteine （Sec） was first successfully bioincorporated into the catalytic center of subtilisin by using an auxotrophic expression system. The studies of the catalytic activity and the steady-state kinetics demonstrated that selenosubtilisin is an excellent GPx-like biocatalyst. In comparison with the chemically modified method, biosynthesis exhibits obvious advantages： Sec could be site-directly incorporated into active sites of enzymes to overcome the non-specificity generated by chemical modification. This study provides an important strategy for specifically targeting and operating selenium in the active site of an enzyme.     

枯草杆菌AS1．398制备中性蛋白酶的研究

本文研究了枯草杆菌ＡＳ１．３９８发酵培养制备中性蛋白酶，对发酵培养基配比，培养条件，金属离子的影响等进行了摇瓶试验。制备的ＡＳ１．３９８中性蛋白酶有如下性质：最适ＰＨ７．２－７．４，在ＰＨ６．５－８．０稳定。最适温度４２－４４℃，３５℃下处理２小时能保持约８５％酶活力，６０℃下１０分钟酶完全失活，此酶被ＥＤＴＡ和Ｃｕ２＋所抑制     

枯草杆菌蛋白酶水解大豆胰蛋白酶抑制剂的研究

采用改进的BAPNA法探讨了枯草杆菌蛋白酶对大豆胰蛋白酶抑制的水解作用,通过实验了最适反应条件为：反应温度40－60,PH值7．5－8．5,酶活力大于等于40000units/mL以及40min的反应时间。     

枯草杆菌诱导型高效表达-分泌系统的构建

利用枯草杆菌蛋白酶缺陷突变株,sacB诱导基因及degQ,degU(Hy)正调控基因构建了诱导型表达-分泌系统以解决枯草杆菌分泌大量胞外蛋白酶和外源基因表达水平不高的问题.采用共转化方法将枯草杆菌IA95的degU(Hy)突变引入枯草杆菌蛋白酶缺陷突变株DB403,获得degU(Hy)和蛋白酶三缺陷的新菌株DB1342;利用sacB基因的启动子--信号序列及芽孢杆菌的两个正调控基因degQ和degU(Hy)构建了诱导型表达-分泌载体pURT3及pURTQ4,由DB1342突变株及pURT3及pURTQ4载体组成枯草杆菌诱导型高效表达和分泌系统.在本系统中内源基因sacB的表达量是原菌株DB403的296倍,将地衣杆菌α-淀粉酶基因引入本系统后在sacB,degQ,degU的调控和蔗糖的诱导下,α-淀粉酶的表达量是在DB403中的140倍,证实degQ及degU对基因表达的增强作用是叠加的.     

枯草杆菌(Bucillus subtilis)细胞质中的二硫键蛋白质

二硫键是维持蛋白质二维和三维结构的重要因素之一,目前已知的二硫键蛋白质主要存在于细胞周质(Periplasm)或真核细胞的细胞器中,大多数是分泌蛋白质或是膜蛋白质,很少存在于细胞质内.一般认为细胞质的高还原势是其缺乏二硫键蛋白质的重要原因,但是,细胞环境不是影响二硫键形成的唯一因素,在细胞(Escherichia coli)的细胞周质内已发现3个能催化二硫键形成的蛋白质,它们是分泌蛋白质形成二硫键必需的.Derman等将细菌中硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin reductase)的基因缺失后,发现在细菌细胞质中合成的外源碱性磷酸酶及其他外源蛋白质能形成二硫键,认为细胞质有催化二硫键形成的机制,只是某些因素如硫氧还蛋白还原酶阻止了二硫键的形成.本文报道了枯草杆菌细胞质中的一个二硫键蛋白质,并讨论了细胞发育状态对该蛋白质合成的影响.