卡那霉素B工程菌的构建及其发酵特性研究

研究高产卡那霉素B产业化工程菌的构建.以主产氨甲酰卡那霉素B工程菌——黑暗链霉菌S.tenebrarius312为出发菌株,进一步敲除氨甲酰磷酸转移酶基因tobZ,获得直接产卡那霉素B的工程菌ST314.对工程菌ST314的生物合成潜力进行研究,在200L发酵罐上进行放大实验,测定各参数,并绘制发酵代谢曲线.结果表明,该菌株遗传特性稳定,产抗能力得到有效恢复,提高幅度接近2倍;该工程菌产卡那霉素B的能力达到4500 U/mL.黑暗链霉菌ST314的研究可以向产业化生产转移.     

通过卡那霉素选择体系再生可育小麦转基因植株

使用卡那霉素作为选择剂建立起一套有效的小麦转化体系.预培养3d的未成熟胚在基因枪轰击前后进行高渗处理,轰击后于26℃、黑暗条件培养2周,然后用150mg/L硫酸卡那霉素选择培养2周,再转至含150mg/L硫酸卡那霉素的再生培养基进行光照培养.再生植株在温室中长出2～3片新叶后用2.5%硫酸卡那霉素水溶液喷洒;4周内,非转化体完全白化并枯萎,而转基因植株生长正常.用水稻Actinl启动子控制nptⅡ基因,卡那霉素选择体系的平均转化频率达到2.6%.高渗处理明显促进瞬间表达效果和稳定转化频率.目前已得到23个转基因小麦株系,大多数已经产生种子.Southem分析表明这些转基因株系均整合有不同拷贝的nptⅡ基因.     

核酸外切酶III辅助的荧光适体 传感器免标记检测卡那霉素

随着抗生素的广泛使用,一些负面影响也随之出现食品和生态环境中残留的抗生素极大威胁着人类的身心健康与生存环境因此,发展快速、便捷的抗生素检测方法对进一步控制抗生素污染有着非常重要的意义该文利用核酸外切酶III能特异性催化dsDNA的特性,构建了核酸外切酶III辅助信号放大的荧光适体传感器用于卡那霉素（Kana）检测当目标物不存在时,双链DNA被核酸外切酶III切成短的寡核苷片段,不能嵌入核酸染料从而表现出低的荧光当卡那霉素存在时,它与相应的核酸适体链结合,从而将双链转变成单链DNA游离的单链DNA不能被核酸外切酶III切割,嵌入核酸染料后表现出很高的荧光信号在最佳实验条件下,该方法对卡那霉素浓度在0.01~50 ng/mL范围内呈线性相关,最低检测限为8.12×10-3 ng/mL废水样品中的加标回收率为96.05%~105.04%,表明该策略可用于实际环境中卡那霉素的检测     

西瓜高效再生系统的研究

采用不同培养基对西瓜(Citrullus Vulgaris)的子叶、下胚轴和茎尖进行分化培养．结果表明：以MS为基本培养基，附加BA0．4mg/L处理时，3d苗龄的子叶的分化频率最高，可达95．5％，12d左右可见不定芽出现．西瓜对卡那霉素(Km)比较敏感，当培养基中添加20mg/L的Km即能完全抑制不定芽和不定根的分化．     

烟酸羟基化菌株睾酮丛毛单胞菌JA1抗性质粒的消除

睾酮丛毛单胞菌JA1可羟基化烟酸产生6-羟基烟酸,并且对多种抗生素具有抗性.碱变性法提取JA1细胞内的质粒, 检测到一个约19 kb大小的质粒.用0.002 5% SDS进行质粒消除实验,结果表明,质粒消除后菌株对卡那霉素敏感,但仍对氨苄青霉素、安普霉素和链霉素具有抗性,推测质粒携带卡那霉素的抗性基因.同时,质粒消除后,JA1菌株烟酸脱氢酶酶活性没有变化,推测烟酸脱氢酶的基因并不在质粒上.     

转基因棉PCR与卡那霉素检测的比较

对尚未提纯的转基因棉１７９自交后代进行卡那霉素检测和ＰＣ检测,结果表明卡那霉素检测与ＰＣＲ检测结果一致;抗卡那霉素植株ＰＣＲ检测均呈阳性,而对卡那霉素敏感植株均未扩增出特异性带。     

苜蓿花叶病毒RNA23''''端cDNA转基因烟草的研究

将克隆的苜蓿花叶病毒中国分离株(AIMV—Ch)RNA23′端cDNA重组到植物表达载体pROKⅡ中，用三亲融合法导入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404，采用叶圆片法转化普通烟草，诱导再生小植株．经卡那霉素抗性筛选和PCR检测，证明AIMV RNA23′端基因已整合到转基因烟草的基因组DNA中．     

大肠杆菌—枯草杆菌穿梭质料载体pSUGV4的构建

作者用DNA重组技术,构建了大肠杆菌-枯草杆菌空梭质粒载体pSUGV4,它是以大肠杆菌（Es-cherichia coli）质粒载体pUC18为骨架,与来自空梭质粒表达载体pREP9含有革兰氏阳性菌复制起点（ori^ )和卡那霉素抗性（kan^r)基因片段重组而成,上述穿梭质粒载体可用于在大肠杆菌（E.coli）和枯草杆菌（Bacillus subtilis）中进行基因克隆工作。     

大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒载体pSUGV4的构建

作者用DNA重组技术,构建了大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒载体pSUGV4,它是以大肠杆菌(Es-cherichiacoli)质粒载体pUC18为骨架,与来自穿梭质粒表达载体pREP9含有革兰氏阳性菌复制起点(on     

三种抗生素注射剂的细菌内毒素检查法研究

对云南省生产的８６批注射用青霉素钠、７５批硫酸卡那霉素注射液和２６批盐酸林可霉素注射液进行了中国药典规定的家兔法与细菌内毒素检测法之间的对比考察，两者的符合率均为１００％．