Decision-making at the surface of the intact or barrier disrupted skin: potential applications for vaccination or therapy

The skin is a highly accessible organ and constitutes an active immunological site. Both these properties make this surface an attractive route for what promises to be a cost-effective, simple, practical and needle-free delivery of vaccines and immunomodulators. Less obvious is the fact that the state of the skin barrier can influence quantitative and qualitative aspects of antigen-specific immune responses. The everyday decision-making at the skin epithelium concerns the choice between the induction of an immune response and the establishment of a state of non-responsiveness (tolerance). This decision is influenced by various factors such as the dose, the route (intact vs barrier-disrupted skin), the cytokine microenvironment and the nature of the antigenic stimulus. By increasing our understanding of how immune responses are regulated in the epidermis we can envisage the development of immunisation protocols aimed at eliciting a protective immune response or inducing tolerance, with direct applications to preventive or therapeutic vaccination, respectively.Received 29 November 2004; received after revision 2 February 2005; accepted 22 February 2005     

新型肠毒素蛋白SElK编码基因的克隆测序、生物信息学分析和表达载体构建

采用微波加热法提取金黄色葡萄球菌基因组DNA,根据NCBI上登录的肠毒素基因sek设计引物,PCR克隆selk基因,对selk基因测序并进行生物信息学分析,在此基础上构建重组表达质粒p ET-32a(+)-selk.测序结果表明本研究克隆得到具有正确编码序列的新型肠毒素selk基因;Protparam分析表明在一级结构水平上该蛋白具有较高的热稳定性;亲疏水性分析表明SEl K蛋白是一个亲水性较高的蛋白质;同源建模表明SEl K蛋白的domain B结构域缺乏传统肠毒素所具有的胱氨酸环,但SEl K蛋白domain B中β-折叠片数量比传统肠毒素更高.这些结果为进一步研究SEl K蛋白的结构与功能奠定基础.     

大肠杆菌热敏肠毒素的检测及纯化

采用平板免疫溶血试验、兔回肠结扎试验,探讨了大肠杆菌耐热肠毒素制备的方法和检测方法。试验表明：平板免疫溶血试验能够快速灵敏地检测出热敏感肠毒素．并具有很强的特异性,比肠结扎试验灵敏度高,而且简便易行;试验将细菌接种到产毒素培养基上培养．进行增菌,然后离心取上清液,沉淀溶于PBS液中用多黏菌素B浸出,均用80％饱和度的（NH4）2SO4盐析,之后用SephadexG-100凝胶层析分离纯化,最后用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测热敏肠毒素的纯度。     

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位在干酪乳杆菌中的分泌表达

以大肠杆菌和乳酸菌穿梭表达型载体pMG36e为基本模型,采用重叠延伸PCR方法拼接相关调控元件构建一种乳酸杆菌组成型分泌表达载体;将编码LTB蛋白的eltb基因片段插入干酪乳杆菌分泌型表达载体中,构建重组质粒pMG36e-UP/L-LTB,电转化于干酪乳杆菌393中,筛选获得重组干酪乳杆菌,应用westernblot方法鉴定LTB表达情况.Western-blot分析显示,约有12 KDa的目的蛋白以分泌形式表达,可被LTB阳性血清识别.表明LTB蛋白在重组干酪孔杆菌获得了表达,并且具有免疫反应活性和佐剂活性,为以LTB为分子佐剂研制乳酸菌黏膜疫苗奠定基础.     

牛奶中苏云金芽胞杆菌的分离与鉴定

采用醋酸钠．抗生素分离法对超市牛奶样品进行苏云金芽胞杆菌（Bacillus thurgngiensis,Bt）的分离,获得2株Bt菌株,分别命名为BtBRC—LJ1和BtBRC-LJ2。利用PCR方法对Bt BRC-LJ1和BtB RC-LJ2菌株幼皿和nheC肠毒素基因的分布进行检测。结果显示,这2个菌株均含有这两种肠毒素基因。     

携带大肠杆菌融合基因K88ac-STII的减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建与鉴定

为构建表达大肠杆菌菌毛蛋白K88ac和热稳定肠毒素STII的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,采用缺失腺苷酸环化酶基因(Δcya)、环腺苷酸受体蛋白基因(Δcrp)以及天冬氨酸β-半醛脱氢酶基因(Δasd)的鼠伤寒沙门菌(X4550)作为宿主,将编码K88ac-STII的融合基因插入Asd 组成型表达载体pYA3334中,通过2次转化引入宿主菌,成功构建了表达K88ac-STII融合基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌株S.typhimuriumX4550(pYA3334K88ac-STII),为防治仔猪腹泻提供了口服活菌疫苗候选株。     

蛇源变形杆菌的分离鉴定

取广西南宁、河池和柳州等地１４０条病死及濒死蛇的心血等作细菌培养。结果分离出细菌２３２株；分类鉴定发现７９株为变形杆菌，占检出菌的３４．１％；种的分类表明，６３株为普通变形杆菌，１６株为奇异变形杆菌；随机抽取其中５株进行毒素测定，均发现有肠毒素产生；做动物试验可致小白鼠死亡；做回归试验，可见蛇血带菌。说明，此变形杆菌具有一定的毒力，是造成蛇感染的常见菌之一，为人兽共患病的传染源，不可忽视。     

巯基自组装的压电DNA传感器技术研究

采用先将寡核苷酸分子标记上巯基基团，通过自组装技术将巯基修饰的寡核苷酸固定于金电极上，研制成的压电DNA传感器一致性，特异性都较好，每次检测杂交后，经过电极的再生，传感器可以重复使用3次，用该传感器检测和传统的斑点杂交方法相比较，具有快速，灵敏，简便等优越性。     

我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌污染调查、耐药性及其肠毒素基因检测

调查了2011—2016年我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌的污染情况,并对分离到的相关菌株进行了肠毒素基因的检测和耐药性分析。收集全国39个城市699份市售食用菌,利用定性和定量检测方法,检出金黄色葡萄球菌阳性样品33份,平均污染率4.72%,污染水平9.75MPN/g。24种抗生素的药敏结果显示,分离株耐药情况严重,对利奈唑胺、利福平敏感,对氨苄西林等22种抗生素都产生不同程度的耐药。7株分离株经表型和分子鉴定确定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。运用聚合酶链式反应法对分离的39株金黄色葡萄球菌进行了18种肠毒素基因检测,约60%分离株携带4~6种肠毒素基因,携带率最高的肠毒素基因是sei,其次是sem、seg、seq、sec、seb、sen。本研究反映了我国市售食用菌金黄色葡萄球菌污染的潜在风险,相关分离株具毒性潜力,且耐药性严重,应引起重视。