大鼠肝卵圆细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除（parital hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心给合免疫磁珠分离方法卵圆细胞（oval cell,OC）.用卵圆细胞标志蛋白OC2和OV6的免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver,RL）、分散的肝脏细胞及分离的卵圆细胞,用RT-PCR定量卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量卵圆细胞的OC2和OV6蛋白.初步证实分离的肝卵圆细胞中,OC2和OV6阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的肝卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离肝卵圆细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用.     

大鼠肝陷窝细胞分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（parital hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60％ Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离陷窝细胞（pit cell）,用分化抗原簇8（cluster of differentiation 8,CD8）和分化抗原簇56（cluster of differentiation 56,CD56）的免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver,RD、分散的肝脏细胞及分离的肝陷窝细胞,用RT—PCR定量肝陷窝细胞的CD8和CD56mRNA,用蛋白免疫印迹定量肝陷窝细胞的CD8和CD56蛋白．初步证实,分离的肝陷窝细胞中,CD8和CD56阳性细胞占95％以上;PH后各时间点分离的陷窝细胞的CD8和CD56的mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定．表明改进的分离陷窝细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用．     

大鼠肝窦内皮细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（parital hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60％ Percoll梯度离心和免疫磁珠分离肝窦内皮细胞（hepatic sinusoidal endothelial cell,SEC）,用分化抗原簇14（cluster of differentiation 14,CD14）和内皮素-1（endothelin-1,ET-1）的免疫组织化学定性、定位再生肝（regenerating liver,RL）、分散的肝脏细胞及分离的窦内皮细胞,用RT—PCR定量窦内皮细胞的CDl1和ET-1的mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量窦内皮细胞的CD14和ET-1蛋白．初步证实,分离的窦内皮细胞中CD14和ET-1阳性细胞占95％以上,从PH后各时间点分离的窦内皮细胞的CD14和ET-1mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定．表明改进的分离窦内皮细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用．     

大鼠肝星形细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（pafital hepatectomy，PH）模型，用两步灌流法分散肝脏细胞，用60％Percoll梯度离心和免疫磁珠相结合分离肝星形细胞，用结蛋白（desmin，DES）和波形蛋白（vimentin，vIM）的免疫组织化学定性、定位再生肝（regenerating liver，RD、分散的肝脏细胞及分离的肝星形细胞，用RT—PCR定量肝星形细胞的DES和VIM mRNA，用蛋白免疫印迹定量肝星形细胞DES和VIM．初步证实，分离的肝星形细胞中DES和VIM阳性细胞占95％以上，从PH后各时间点分离的肝星形细胞的DES和VIM mRNA量稳定，相应的蛋白量亦稳定．表明改进的分离肝星形细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点，值得采用．     

大鼠肝库普弗细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（partial hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60％Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离库普弗细胞（Kupffer cell,KC）,用外胚层发育不良抗原2（ectodermal dysplasia antigen2,ED2）和溶菌酶（lysozyme,LYZ）的免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver,RL）、分散的肝脏细胞及分离的库普弗细胞,用RT—PCR定量库普弗细胞的ED2和LYZmRNA,用蛋白免疫印迹方法定量库普弗细胞的ED2和LYZ蛋白．初步证实,分离的肝库普弗细胞中ED2和LYZ阳性细胞占96％以上,从PH后各时间点分离的库普弗细胞ED2和LYZmRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定。表明改进的分离库普弗细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用．     

大鼠胆管上皮细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,在32%～90%Perco11密度梯度离心法的基础上进一步用免疫磁珠分离胆管上皮细胞(biliary epithelial cell,BEC),用γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transferase,GGT)和角蛋白19(cyto-keratin19,CK19)免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的胆管上皮细胞,用RT-PCR定量胆管上皮细胞的GGT和CK18mRNA,用蛋白免疫印迹定量胆管上皮细胞的GGT、角蛋白18(cytokeratin 18,CK18).初步证实分离的细胞中GGT和CK19阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的胆管上皮细胞的GGT和CK18mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离胆管上皮细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,方便适用.