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小鼠Bpi条件基因打靶载体的构建和鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
目的构建小鼠Bpi条件基因打靶载体,为建立Bpi条件基因打靶小鼠模型和深入研究Bpi基因功能奠定基础。方法采用Cre/LoxP系统,选择小鼠Bpi基因第2、3外显子作为条件性敲除的目的片段,并在其两侧插入LoxP位点;运用LA-PCR技术,以129品系小鼠ES细胞基因组DNA为模板分步扩增包括Bpi第2、3外显子(中间同源臂)和上游同源臂在内的3.1 kb基因片段以及下游同源臂4.9 kb基因片段;构建pBSKⅡ-5SLoxP和ploxPFRTNeo-3L重组质粒,将前者酶切产物(3.1 kb)与酶切后的ploxPFRTNeo-3L质粒相连获得Bpi条件基因打靶载体。结果经多个限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的pBSKⅡ-5SLoxP、ploxPFRTNeo-3L重组质粒和Bpi条件基因打靶载体结构正确,与设计相符。结论成功构建了小鼠Bpi条件基因打靶载体。 相似文献
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将合成的CRM197基因片段克隆到表达载体pBAD-DEST49中,转化到大肠杆菌菌株（ATCCMC1061）．经阿拉伯糖诱导,CRM197获得高效表达．目的蛋白主要以包涵体形式存在,变性、复性后经DEAE阴离子交换后获得高于95％纯度的CRM197样品．用该样品做Westernblotting鉴定后,能得到单一的特异性条带．本实验的表达策略,为CRM197进一步生产及应用奠定基础． 相似文献
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