小球藻表达β胡萝卜素酮化酶基因提高虾青素的量

文章以G418抗性基因(NPTⅡ)作为选择标记基因,建立以PBI121为表达载体,农杆菌为介导的小球藻(Chlorella zofingiensis)遗传转化体系。确定了G418质量浓度为0.8 mg/L和羧苄青霉素质量浓度为500 mg/L的小球藻筛选体系,GFP为报告基因,从DNA和RNA水平上鉴定转化子阳性,通过激光共聚焦检测到了GFP的表达,从而建立了农杆菌转化体系。为提高小球藻的虾青素表达量,文章克隆八氢番茄红素脱氢酶基因信号肽PDSSP为信号肽以及克隆β-胡萝卜素酮化酶基因Crto,用overlap聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术构建PDSSP-Crto融合基因,并将融合基因克隆至表达载体PBI121∶35S∶PDSSP-Crto,利用上述农杆菌介导小球藻遗传转换方法转化小球藻。结果表明,转化子小球藻虾青素的质量比为0.564 mg/g,野生型为0.345 mg/g,比野生型高63.5%,有效地提高了小球藻虾青素的表达量。