沙田柚和酸柚花粉壁蛋白的双向电泳分析

采摘沙田柚(Citrusgrandisvar.shatinyuHort)以及野生酸柚(CitrusgrandisL.)盛花期的雄花,将两者的花粉放入冷的pH6.7,1%NaCl缓冲液[10%蔗糖,0.45mmol/LCa2+(CaCl2·6H2O),1.63mmol/LB(H3BO3)],分别在5,10,20,30,40,50,60,180min时间提取后抽滤,滤液含壁蛋白.双向电泳(IEF/SDS-PAGE)对沙田柚和酸柚花粉壁不同时间蛋白提取物进行比较分析.结果表明,两者的蛋白质分布格局明显不同:沙田柚花粉壁的蛋白质斑点主要分布于pH7.2～5.8之间,而酸柚的花粉壁蛋白质斑点密集于pH8.0～6.5和pH5.8～4.0两个区域范围之间;就相对分子质量分布区域而言,沙田柚花粉壁的蛋白质斑点主要密集于14.4～43.0ku,而酸柚在20.1～43.0ku和66.2～97.4ku两个区域内分布有较多的蛋白质斑点.     

沙田柚花柱S-糖蛋白的分离及鉴定

采用层析和电泳相结合的技术,分离和鉴定沙田机花柱中与自交不亲和相关的蛋白质,结果表明：自交沙田柚花柱蛋白质提取液的３５％（ＮＨ４）２ＳＯ４盐析级分,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－５０层析,可得２个峰,其中峰Ⅰ具有抑制自交花粉管生物的活性,峰Ⅰ含２种蛋白质,且均为糖蛋白,蛋白质Ａ相对分子质量为３２．１０ｋｕ,等电点为ｐＨ７．２;蛋白质Ｂ相对分子质量为２５．１２ｋｕ,等电点为ｐＨ６．４．峰Ⅰ还具有核酸酶活性     

沙田柚花柱S-糖蛋白的纯化和N-端序列测定

以人工自花授粉3d后的沙田柚（Citrus grandis var.Shatinyu Hort.）花柱为材料,切取1/2部位处花柱组织,匀浆后,进行抽提和硫酸铵盐析,得到35%级分的蛋白质粗提液,此液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,显示出9条蛋白质带;经ConA-Sepharose4B亲和柱层析,特异峰（S^#）仅显示1条蛋白质带,恰好是35%级分中近正极端的2种蛋白质中的一种最优势蛋白质;部分生化性质测定结果表明,该蛋白质为碱性糖蛋白,糖含量为9.2%,由2个亚基组成,相对分子质量分别为38.0ku,32.0ku,等电点分别约为7.5,7.2;生物活性测定结果表明,该蛋白质能抑制离体（in vitro)萌发自花花粉花管的生长;氨其酸序列分析表明,32.0ku组分N-端15个氨基酸序列与矮牵牛,花烟草等的N-端相应序列极相似。     

沙田柚自交花柱S1-RNase的免疫胶体金定位

采用免疫胶体金标记抗体技术成功地检测了沙田抽自交花柱中存在的Ｓ１－ＲＮａｓｅ结果表明：沙田柚自花授粉后１,２,３ｄ１／２处花柱段的Ｓ１－ＲＮａｓｅ分别定位于内质网、高尔基区、纤维内壁和纤维外壁;同时分析了自花授粉后１－３ｄ的Ｓ１－ＮＲａｓｅ的动态变化,及其参与沙田柚自交不亲和返应的可能机理,为高等植物自交不亲和机理的解释丰富实验证据。     

沙田柚花粉蛋白质双向电泳分析

比较分析沙田柚花粉不同发育时期和自交、异交花粉蛋白质的双向凝胶电泳图谱，随着花粉的发育，其蛋白质格局始终处于变化之中，单核期和双核期花粉中相对分子质量小的蛋白质明显增多，萌发的花粉中相对分子质量小的蛋白质亦较多，是与此时花粉生理活动旺盛有关，自交、异交花粉蛋白质格局无明显差别，但是发现异交粉管中一些蛋白质在自交花粉中缺失或含量较低，说明自交条件下花粉管一些蛋白质表达可能受到了抑制，该结果为“膜受体假说”提供了一个新的实验证据。     

沙田柚各器官特异蛋白质的研究

利用SDS-PAGE对沙田柚(Citrus grandis var.Shatinyu Hort.)的茎、叶、花萼、花瓣、花药、花柱和子房的可溶性蛋白质进行比较分析,检测到茎中的分子质量31.0 ku,叶中的56.0 ku,花药中的59.0 ku,58.0 ku, 44.0 ku,37.2 ku,36.0 ku,35.5 ku,33.0 ku,21.0 ku,15.4 ku,花柱中的43.0 ku, 38.5 ku,子房中的33.5 ku的蛋白质分别为各器官的特异蛋白质.对茎、叶、花药、花柱的全蛋白质进行IEF-SDS-PAGE双向电泳分析结果也确定了相应于各自SDS-PAGE上特异蛋白质带的特异斑点,而且,SDS-PAGE图谱上的一条蛋白质带在IEF-SDS-PAGE双向图谱上呈现等电点不同而分子质量相同的几个斑点.各器官的蛋白质含量以花药的最高,花萼的为最低.     

沙田柚花柱蛋白提取液的生化特性研究

通过血凝活性和糖基抑制实验方法，对沙田柚不同发育时期１／２花柱蛋白提取液进行测定。实验结果揭示，花柱蛋白提取液中存在一种能与伴刀豆球形蛋白相结合的糖蛋白，具血凝活性。     

沙田柚花粉管特异蛋白的免疫细胞化学研究

从沙田柚自交花粉管中提取与自交不亲和相关蛋白,应用免疫胶体金标记抗体技术检测沙田柚Citrus grandis var.Shatinyu Hort.自花授粉后3 d 1/2花柱中花粉管特异蛋白的定位分布.结果表明,花粉管特异蛋白在花粉管中依次定位于内质网、细胞质和细胞纤维壁上.     

枫香树树胶管的发生发育及分布研究

通过对可采割枫香树（ＬｉｇｕｉｄａｍｂａｒｆｏｒｍｏｓａｎａＨ．Ｒｅｓｉｎ）的嫩枝和主茎解剖学观察,弄清了枫香树主茎树胶管的发生发育及分布规律：二年生嫩枝横切面上未发现有树胶管形成。在主茎次生木质部中的垂直与横向树胶管分别由形成层的纺缍状原始细胞和射线原始细胞衍生而来,以裂生方式发生和发育,分布于当年年轮线靠晚材部分,当年形成的树胶管具泌脂能力。次生木质部垂直和横向树胶管联结成二维系统。根据树胶管的发生发育及分布规律,提出相当的采脂方法。