NF-κB相互作用多肽原核表达载体的构建、表达与纯化

为了获得高纯度的可溶性NF-κB相互作用多肽,首先以酵母双杂交技术筛选获得的NF-κB相互作用多肽的酵母表达质粒pGAD GH/pp10为模板,扩增多肽基因片段,后经BglⅡ,StuⅠ双酶切后连接到pET-42a(+)载体中,构建GST/多肽融合蛋白的原核表达载体,并将GST/多肽融合蛋白的原核表达载体转化入BL-21菌株,用0.4 mmol/L IPTG于30 ℃诱导表达4 h,后经GST亲和纯化GST/多肽融合蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定融合蛋白的表达和纯度.实验结果表明,成功地构建了NF-κB相互作用多肽的GST/多肽融合蛋白原核表达载体,进行了GST/多肽融合蛋白的诱导表达,融合蛋白的表达为可溶性表达,最终纯化获得纯度约为80%的可溶性GST/多肽融合蛋白,这将为后继利用GST pull-down,Bio-sensor,EMSA等实验进一步验证NF-κB相互作用多肽的功能提供可靠的材料来源奠定基础.     

黄瓜组织培养与蛋白含量及抗氧化酶活性的变化

通过对黄瓜子叶组织培养,研究了黄瓜子叶外植体龄对愈伤组织诱导的影响及体内可溶性蛋白含量,CAT,POD,SOD几个生理指标的变化及其与愈伤组织诱导的关系.结果表明:接种在MS(MS+6-BA(1 mg/L)+AgNO3(2 mg/L))培养的3～5 d子叶外植体的愈伤组织诱导能力最强.子叶的抗氧化酶活性及蛋白含量与诱导愈伤组织能力之间存在明显相关性,CAT和SOD与愈伤组织诱导呈负相关,POD和蛋白含量与愈伤组织诱导呈正相关.