CaMBP—10调节生长素应答反应机理初探

前期研究发现ＣａＭＢＰ－１０参与植物细胞对生长素应答反应的调节，但调节机理有待阐明，本文表明ＣａＭＢＰ－１０是由于影响质膜Ｈ－ＡＴＰａｓｅ活性，进而影响了质子外泌和细胞伸长，并进一步证明，它对质膜Ｈ－ＡＴＰａｓｅ活性的调节是通过介导该酶磷酸化而实现的最终调节了细胞对激素的应答。     

拟南芥钙调素结合蛋白cDNA克隆的分离和初步鉴定

以生物紊标记的钙调素为探针，从拟南芥（Arabidopsis thaliana）λZAP Ⅱ cDNA表达文库中分离到9个阳性克隆．融合蛋白经CaM-gel overlay分析，其中Y1编码的融合蛋白在1mmol／L Ca^2＋存在下与胶体金标记的钙调紊有明显结合．序列测定结果显示其外源片段全长为726bp，含有一个476bp的开放阅读框．GenBank数据库搜索及同源性分析结果表明该序列为拟南芥1号染色体基因组5661～7013序列，编码一未知蛋白，但与真核生物翻译起始因子5A（elF5A）具87％的同源性，并具相似的分子量、等电点和相同的保守序列．与eIF-5A的结构特征比较，可初步确定Y1编码的蛋白为真核生物翻译起始因子5A家族中的新成员．即拟南芥1号染色体5661～7013序列为一尚未报道的翻译起始因子基因＋蛋白质二级结构预测其c端122～135氨基酸残基处有一双亲α-螺旋结构，这一结构与大多数钙调素结合蛋白中的钙调素结合位点的结构特征一致．该序列已提交NCBI Banklt数据库，登录号为AF492850．     

CaM BP-10对生长素诱导的小麦芽鞘伸长及介质酸化的抑制作用

植物生长素参与植物生长和发育许多方面的调节,有关其调节机理的研究进展活跃。继Rayle(1970)的酸生长理论后,很多研究表明生长素的调节机制与Ca~(2+)紧密相关,Ca~(2+)在植物激素信号的传导中起着信使作用。钙调素(Calmodulin,CaM)是存在于所有真核细胞中的主要钙结合蛋白,参与动植物细胞过程中众多功能的调控。Raghothama等(1985)的研究表明,CaM与生长素导致的细胞伸长有关,Ca~(2+)的信使作用是通过CaM来实现的。     

金标银染技术在表达文库筛选中的应用

以胶体多标记钙调素作为探针再辅以银染法（金标银染技术）,自玉米ｃＣＮＡ表达文库中筛迁钙调素结合蛋白。该探针保持钙调素的活性,特异性地与钙调素结合蛋白相结合,在胶体金标记的基础上进行银染,灵敏度获得显著提高（达ｎｇ级）。应用这一方法对玉米ＣＮＤＡ表达文库进行筛选获得了一个与探针特异结合的阳性克隆。以生物素标记的钙调素对该克隆表达的融合蛋白进行结合实验,结果表明该克隆编码的蛋白为一个钙调素结合蛋白。本