利多卡因对人角膜上皮细胞的毒性作用及其机理研究

利用不同浓度利多卡因（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）处理体外培养的人角膜上皮（ＨＣＥＰ）细胞系细胞,利用光镜观察、ＭＴＴ、荧光染色、ＤＮＡ电泳、ＴＵＮＥＬ、流式细胞仪和透射电镜方法研究了利多卡因对 ＨＣＥＰ细胞的毒性作用及其机理。光镜观察和 ＭＴＴ检测结果显示,质量浓度 １２５～１０００ｇ／Ｌ的利多卡因对 ＨＣＥＰ细胞具有显著的毒性作用,并具有浓度和时间依赖性;ＡＯ／ＥＢ荧光双染色结果显示,质量浓度 ０６２５～１００００ｇ／Ｌ的利多卡因可引起 ＨＣＥＰ细胞的质膜通透性显著提高,细胞凋亡率也具有浓度和时间依赖性;ＤＮＡ电泳和 ＴＵＮＥＬ检测结果显示,利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞发生 ＤＮＡ断片化;ＴＥＭ观察结果显示,利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞的超微结构出现了凋亡细胞的形态结构特征,如胞质空泡化、染色质浓缩、线粒体膨胀且嵴的结构紊乱、出现凋亡小体等;ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ染色的流式细胞仪检测结果显示,利多卡因能引起 ＨＣＥＰ细胞质膜中的磷脂酰丝氨酸（ＰＳ）发生外翻变化;ＥＬＩＳＡ检测结果显示,利多卡因还能引起 ＨＣＥＰ细胞中胱冬肽酶3、8、9、10表达量的增加,表明利多卡因确能引起 ＨＣＥＰ细胞发生细胞凋亡,而不是细胞坏死。由此可见,利多卡因在质量浓度大于 0.625ｇ／Ｌ时对 ＨＣＥＰ细胞具有显著的细胞毒性,并具有浓度和时间依赖性,且其毒性作用的发挥是通过诱导细胞凋亡实现的,在眼科临床应用中具有很大的毒副作用,应谨慎使用。     

企业知识管理系统的可拓评价方法

针对现有企业知识管理系统评价的定性、定量方法不足的问题,从企业知识管理系统的特点出发建立了一套定性和定量相结合的评价指标体系,引入可拓评价方法构建了企业知识管理系统的可拓评价物元模型,并用实例说明该模型用于企业知识管理系统评价是可行的、实用的,从而为企业知识管理系统的定性、定量评价提供了一种新方法。     

短蛸血细胞的形态结构、类型、细胞化学特性及其吞噬活性研究

血细胞作为免疫防御的第一道防线，在软体动物的非特异性免疫系统中具有重要作用.为了揭示头足类动物血细胞的形态结构、生物学性质及其免疫学功能，实验利用活体染色、细胞化学和电镜技术等对短蛸血细胞的形态结构、类型、细胞化学性质及其弧菌吞噬活性进行了研究.研究结果显示：短蛸血细胞具有大透明细胞、小透明细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞4种类型.大透明细胞约占血细胞总数22.6%，平均直径为11.64±0.82?μm，胞质中没有或仅含有很少量的颗粒，细胞表面光滑无伪足伸出；小透明细胞约占血细胞总数的1.7%，平均直径为8.88±0.88?μm，胞质中仅含有少量颗粒，细胞核对台盼蓝呈阳性反应，核质比较大；小颗粒细胞约占血细胞总数的50.7%，平均直径为12.82±1.54?μm，胞质中具有许多大小较为均一的嗜碱性小颗粒，有些细胞内还含有小空泡，不为中性红所着色，疑为颗粒脱内容物所致，细胞表面有较短伪足伸出；大颗粒细胞约占血细胞总数的25.20%，平均直径为13.66±1.50?μm，胞质中具有大小不匀的许多嗜碱性颗粒，有些细胞内也含有不为中性红所着色的较大空泡，细胞表面有许多长伪足伸出.颗粒细胞中所含有的大量嗜碱性颗粒可能与蛋白质等分泌物的活跃合成有关.大颗粒细胞还具有全质分泌的特性，小透明细胞极可能是大颗粒细胞全质分泌后的一时性残余胞体.弧菌吞噬实验结果表明，两类透明细胞均没有弧菌吞噬活性，两类颗粒细胞均具有弧菌吞噬活性，暗示这两种颗粒细胞很可能是短蛸发挥细胞免疫功能的关键性细胞，不仅与某些物质的活跃合成与分泌有关，而且可能还直接参与了外来病原的吞噬及清除.研究结果为揭示短蛸血细胞在非特异性免疫防御中的作用奠定了基础，对于丰富软体动物免疫学也具有重要的科学价值.     

甲壳动物酚氧化酶分子结构与生物化学性质的研究进展

酚氧化酶是一种含铜金属酶,是酚氧化酶原激活系统级联反应链中的关键酶,通过催化黑化反应在无脊椎动物非特异性免疫中具有重要作用。本文综述了甲壳动物酚氧化酶的分子结构及其生物化学性质。     

贝特舒对人角膜上皮细胞凋亡诱导作用的实验研究

为了揭示常用青光眼药物贝特舒(betaxolol)对人角膜上皮(HCEP)细胞的毒性及其作用机理,使用不同质量浓度贝特舒对体外培养HCEP细胞进行了处理,并利用倒置显微镜跟踪观察了细胞的生长和形态,用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光双染色法检测了质膜的通透性,用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA的断片化,用透射电镜检测细胞的超微结构。发现在0.17500~2.80000g/L的质量浓度范围内,贝特舒对HCEP细胞具有显著的毒性,并随着质量浓度的提高和处理时间的延长而逐渐增大,处理24h即可使大部分细胞皱缩死亡;进一步的研究结果发现,质量浓度为0.17500~2.80000g/L的贝特舒能显著提高HCEP细胞的质膜通透性,并使其出现DNA断片化、染色质凝缩和形成凋亡小体等凋亡细胞的结构变化。可见,在贝特舒0.17500~2.80000g/L的质量浓度范围内对HCEP细胞具有显著的毒性,并具有质量浓度和时间依赖性,其毒性作用的发挥是通过诱导细胞凋亡实现的,在眼科临床应用中毒副作用极大。