用STM证实质粒pUC18DNA分子新构象的存在

用清高妥液法从大肠杆菌ＢＨ１０１细胞制备出的多拷贝质粒ＰＵＣ１８ＤＮＡ分子的构象具有复杂的多样性，我们在对其进行ＳＴＭ研究计，证实了一种不同于已知构象的新构象的存在。     

质粒pUC18 DNA的超凝集结构

1966年Vinograd论述了双链DNA有四种不同的拓扑结构形式:超螺旋DNA(Ⅰ型)、松弛型DNA(Ⅱ型)、线型DNA(Ⅲ型)以及碱变的超螺旋DNA(Ⅳ型)。后来,一组瑞士科学家证实了由互补单链环形DNA在体外退火形成的Ⅴ型DNA。1990年,黄熙泰等人发现从Ⅱ型DNA拓扑异构酶缺陷的大肠杆菌SD 108株细胞制备的质粒pBR 322 DNA样品含有一种区别于已知五种结构类型的DNA成分。由于它的高密度和高淌度,这种成分被称为超凝集型DNA(Super condensed DNA)。     

以 16S-23S rDNA 间区序列为目的基因设计 PCR 引物鉴定多杀巴斯德氏菌

多杀巴斯德氏菌是养殖动物(鸡,猪,牛等)的重要致病菌.本研究以16S-23S rDNA间区序列为目的基因设计PCR引物鉴定多杀巴斯德氏菌.通过对多杀巴斯德氏菌ITS-IA(含有tDNA-Ile和tDNA-Ala的16S-23S rDNA间区序列)的测序和与GenBank中序列的BLAST,设计筛选了一对特异引物PS-F/PS-R.对引物的特异性和有效性,用PCR方法进行了验证.结果表明:所有的多杀巴斯德氏菌标准菌株和分离菌株都能被检出,而全部39株非多杀巴斯德氏菌都没有扩增出特异性条带.其检测灵敏度能达到102CFU/mL.研究结果表明,发展了的PCR鉴定方法是省时的和可靠的,整个过程只需要20 h,而传统的鉴定方法需要至少5 d的时间.     

一种特殊拓扑学结构DNA的发现

从生物体中分离到的共价闭合环形DNA(ccc DNA)样品含有连系数不同的拓扑异构体。在DNA嵌入试剂的存在下,这些拓扑异构体可被琼脂糖凝胶电泳分离成连续的梯形区带。我们从一株Ⅱ型DNA拓扑异构酶缺陷的大肠杆菌(E. coli SD108 topA~+,gyrB 225,pyrF 287)细胞中抽提到     

在拓扑异构酶Ⅰ缺失的大肠杆菌中拓扑异构酶Ⅲ参与高负超螺旋的消除

在拓扑异构酶Ⅰ缺失的大肠杆菌突变株中,抑制转录和翻译可以消除高度负超螺旋.为了检测起作用的拓扑异构酶,在拓扑异构酶Ⅰ缺陷的菌株中,以萘啶酮酸抑制旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ的活性,结果表明并未影响高度负超螺旋的消除.进一步作了拓扑异构酶Ⅰ,旋转酶,拓扑异构酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ的体外松弛实验,结果表明,拓扑异构酶Ⅱ可以松弛高度负超螺旋到正常的超螺旋水平.可以认为拓扑异构酶Ⅱ负责松弛高度负超螺旋并受到某种信号机制的调控.     

Ser10磷酸化的组蛋白H3和微管蛋白在小麦根尖细胞有丝分裂过程中的动态分布

利用间接免疫萎光标记技术研究Ser10磷酸化的组蛋白H3和微管蛋白在小麦根尖细胞中有丝分裂过程中的动态分布情况.结果显示在小麦根尖细胞有丝分裂过程中Ser10磷酸化的组蛋白H3的出现和消失与染色体的凝集和解凝集的过程存在时空上的相关性,在有丝分裂的过程中这种蛋白在着经线粒上的定位有有助于染色体向两极移动.研究结果还表明,在有丝分裂过程中,微管蛋白发生了重组,成束的垂直排列在赤道板的两侧,协助细胞有丝分裂过程的顺利完成.     

Thr3磷酸化的组蛋白H3在MCF-7细胞有丝分裂中的时空分布

利用SDS-PAGE和Western blotting证明了MCF-7细胞中组蛋白H3 Thr 3磷酸化是有丝分裂期特异性的.间接免疫荧光标记和激光共聚焦显微镜显示H3 Thr 3磷酸化起始于MCF-7细胞早前期的整个核中.事实表明,这种整体性的磷酸化是有丝分裂期间染色体整体性的变构凝集所必需的.中期,以点状分布的Th...     

产毒性大肠杆菌CFA／I基因表达与DNA超螺旋状态的关系

将CFA／I结构基因(cfaABCE)克隆到载体pJRD184上构建了质粒pJGX15A，并将其转入大肠杆菌fDpA野生株E．coli HB101和topA缺陷株E．coli DM800中．Western blot测定的结果表明，在CFA／I的正调控基因cfaD基因缺失时，两株重组菌株都能够表达CFA／I抗原．分别抽提两个重组菌株对数前期和对数中期的质粒pJGX15ADNA，并对其进行氯喹琼脂糖凝胶电泳分析，结果显示E．coli DM800细胞中质粒pJGX15A的负超螺旋水平比野生型细胞E．coli HB101中的较低．同时，菌落免疫酶斑分析的结果显示DM800受体菌中CFA／I的表达水平比HB101受体菌中的表达水平高．实验结果表明，CFA／I结构基因的表达与DNA负超螺旋水平有明显的负相关性，与负超螺旋促进基因表达的看法不同．     

一种特殊的DNA拓扑结构形式

透射电子显微镜研究表明,质粒ｐＢＲ３２２ＤＮＡ分子中有一定特殊的拓扑结构因子,这种拓扑结构因子能阻止超螺旋扭力在整个分子内的传递。细胞内的巨大染色体ＤＮＡ可能被这种结构分隔成较小的环。