Tm值差异型不对称PCR方法的建立及其在分子诊断中的应用

多数分子诊断方法对靶基因的检测都是以单链DNA为基础的,如何获得大量和高质量的单链靶DNA分子一直是研究热点.以包含BRCA1基因上3个单核苷酸多态性(SNP)的DNA片段为研究对象,通过调整不对称扩增引物碱基序列组成(5′-端引入错配或加入锁核苷酸(locked nucleic acid,LNA)),使用相差10倍浓度来增加不对称引物间Tm值差异,改进扩增条件(添加增强剂的扩增缓冲液,不同退火温度的二阶循环扩增程序)后,进行不对称扩增来产生大量单链靶DNA产物.结果表明Tm差异型不对称PCR(Tm difference asymmetric PCR,TDA-PCR)可有效提高单链DNA分子产率,降低引物设计难度,也扩大了模板序列的适用范围.此外,还针对禽流感病毒H5N1的血凝素(haemagglutinin)HA基因保守序列进行不对称扩增,用获得的单链DNA为模板进行焦磷酸测序检测,所得结果与参考序列一致且无明显干扰信号.因此,采用Tm值差异型不对称PCR可使焦磷酸测序等分子诊断流程更为简便,成本更低,效率更高,具有很好的通用性和实用性.     

ACCPA,RF及Ig对类风湿性关节炎诊断价值的探讨

目的研究抗环瓜氨酸抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibodies,ACCPA)、类风湿因子(RF)及免疫球蛋白(Ig)对类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)的诊断价值,为临床应用提供参考。方法以RA患者作为病例组,健康体检人群为对照组,对两组血浆中ACCPA,RF及Ig水平进行检测,分析判断每种指标对于RA诊断的敏感性和特异性,对其测定结果用SPSS19.0软件进行统计学分析。结果在3种诊断指标中RF的敏感性为81.25%,特异性为77.08%;Ig敏感性为85.42%,特异性为47.92%;ACCPA敏感性为66.67%,特异性为93.75%;但是,三者联合对于RA诊断的敏感性和特异性分别为98.85%和73.9%。结论 ACCPA,RF及Ig三种指标联合用于RA诊断,不仅有较高的敏感性和特异性,而且也可以根据ACCPA来判断RA患者的严重程度,在临床应用中有良好的推广价值。