视黄酸对BEL—7402细胞酶活性及基因表达的影响

人肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞分别以５μｍｏｌ／Ｌ、２０μｍｏｌ／Ｌ和５０μｍｏｌ／Ｌ的视黄酸（ＲＡ）处理后,细胞生长明显受抑,平均细胞群体倍增时间延长,并呈ＲＡ浓度及处理时间依赖性关系．经２０μｍｏｌ／ＬＲＡ处理的细胞中,ｒ－谷氨酰转肽酶（ｒ－ＧＴ）活性自给药后第２天即持续下降,至第６天降至４４．５％,而酪氨酸－α－酮戊二酸转氨酶（ＴＡＴ）活性则持续增高,至第６天较对照组高近１倍．经２０μｍｏｌ／ＬＲＡ处理５ｄ后,ＲＮＡ斑点杂交分析表明ｐ５３基因转录加强,而Ｎ－ｒａｓ基因表达下降,提示该两基因的表达变化可能在ＢＥＬ－７４０２细胞的生长抑制及逆转过程中起重要作用,有关机制尚待深入研究．     

纳氏测氨法半定量诊断HP感染的方法及其应用

对纳氏测氨法尿素酶试验（ＮＵＴ法）进行半定量标准化后，进一步建立了纳氏测氨半定量诊断人胃粘膜中幽门螺杆幽（ＨＰ）感染程度的方法，使ＮＵＴ法可同时用于定性及半定量诊断ＨＰ感染及感染程度．对经过半定量检测的３５０例患者作分析，显示轻、中、重度感染比率分别为５４．６％、３４．０％及１１．４％，另对其中１８２例慢性浅表性胃炎进行病变程度与ＨＰ感染程度的相关性分析，表明慢性浅表性胃炎的病变程度与ＨＰ的感染程度呈明确的正相关性（ｐ＜０．０５），提示胃部疾病的恶性演变尚与感染程度有关．     

ELISA定量测定单克隆抗体方法改进

本文介绍了以亲和层析纯化的免抗鼠IgG类抗体及其酶标物作为捕获及检测抗体进行鼠杂交瘤培养上清及腹水中IgG类单克隆抗体的ELISA定量测定方法。结果表明:小牛血清(BS)、免血清(RS)、马血滑(HS)、人血清(HuS)及非抗体产生细胞的培养上清对本项εLISA实验无干扰,使测定的结果较可靠,测定的鼠IgG各亚类的标准曲线的线性范围均在5～100ng/ml之间,因此这个快速、可靠的方法可为鼠IgG类单克隆抗体的定量测定提供一种实用的手段。     

辣根过氧化物酶标记电化学聚合间苯二胺膜的研制

探讨了电聚合间苯二胺(PDA)膜的电化学聚合、活化及偶联辣根过氧化物酶(HRP)的条件及其性能,结果表明:制成的膜较薄(<1.0μm),在电极表面结合牢固,电聚合膜上有较多可供生物活性材料偶联的氨基,经戊二醛共价交联在膜上的HRP与膜结合牢固,在样品检测中性能稳定,重现性较好,使用及保存寿命较长,是制备生物传感器的良好膜材料,可望在免疫电极及微型电极方面应用。     

用荷瘤裸鼠模型研制抗人肝癌单克隆抗体

1985年Watanabe等报道:用去胸腺载瘤小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP 2/0融合获得抗结肠癌单克隆抗体之后,利用荷瘤裸鼠模型成功研制抗人肿瘤单抗的报道已相继出现:但所获单抗多为IgM,IgG类的单抗得率不高,本工作采用多次手术大部切除瘤块的方法延长荷瘤裸鼠的成活期,获得一株抗人肝癌IgG类单抗、其研制过程和结果报道如下。     

最小方差自适应控制在并条机自调匀整中的应用

首先从力学和统计学的角度分析了并条机在棉条的并条过程中引起测量罗拉位移和振动的的不确定因素。系统的随机性和非线性性影响了传统的自调匀整装置的控制效果。采用最小方差自适应控制技术是解决受控系统不确定性的理想方案。接着介绍了采用广义最小二乘法得到系统统识别模型的原理和方法，并介绍了最小方差自适应调节器的设计步骤及计算机仿真的方法。试运行表明，系统的输出跟踪系统输入的性能得到了较好的改善，系统对随机干扰的抑制能力得到了增强，自调匀整的效果得到了明显的改善。     

快速点突变的优化方法

DNA传统的快速点突变方法即"一步突变法"虽然可使DNA产生突变,但效率不高.市场上出售的快速点突变试剂盒,其突变效率可达80%以上,然而价钱昂贵.本文论述的快速点突变方法,在传统的"一步突变法"基础上做了改进,通过对引物突变点5′端序列Tm值的确定,使引物设计变得简单,初学者可轻松完成DNA的定点突变,而且大大降低了成本,适用于对大量DNA进行定点突变试验.试验结果表明:这种经过改良的方法突变率为96.22%,可为研究人员的试验带来便利,是一种值得推广的新方法.     

荧光定量检测细胞绿色荧光蛋白技术的建立与应用

绿色荧光蛋白是在生化与分子生物学研究领域中普遍使用的一种基因表达报告系统显色物.对于细胞内绿色荧光蛋白表达水平的定量检测,目前尚缺乏一套准确﹑简便﹑易行的技术.本文以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,用分子量为25 ku的线性聚乙烯亚胺介导进入HeLa细胞并表达.利用多功能酶标仪测定细胞裂解液的荧光强度,结果显示:这种新方法测定的荧光强度能很好反映细胞中EGFP的蛋白表达水平,并在短时间内完成对EGFP表达水平的定量检测.该方法简单有效,且不依赖于大型仪器设备,具有较高的准确性与灵敏度,在实际应用中简便可靠,具有推广应用的意义.     

线性与分枝状聚乙烯亚胺介导基因体外转染的比较与研究

聚乙烯亚胺(PEI)是一类新兴的阳离子多聚物非病毒载体,可缩聚DNA分子形成颗粒并转入真核细胞进行表达.本文选用分子量750 ku分枝状PEI与分子量25 ku线性PEI转染增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因于HeLa细胞,并对这两种PEI的转染效率进行比较.利用MTT法检测比较线性PEI与分枝状PEI的细胞毒性.通过凝胶阻滞实验比较两种PEI结合DNA能力.最后利用肝素介导释放实验比较两者在形成PEI/DNA复合物后释放DNA的能力.研究结果表明:线性PEI转染效率优于分枝状PEI,且随PEI/DNA质量比的增加而升高,而分枝状PEI则相反;两种PEI细胞毒性在一定范围内相近;分枝状PEI结合DNA能力略强于线性PEI;但是分枝状PEI释放DNA的能力远小于线性PEI.这可能导致DNA在细胞内无法从PEI/DNA复合体上释放出来,从而影响转录的正常进行,最终导致分枝状PEI转染效率下降.