植物NAD-IDH基因克隆及体外表达酶活力分析

植物NAD⁺-依赖型异柠檬酸脱氢酶(NAD-IDH)是一多功能酶. 以拟南芥生态型“Columbia gl1”及甘蓝型油菜三系“陕2A”, “陕2B”和“垦C1”的叶片为材料, 采用RT-PCR方法成功地从每种植物材料中分别克隆了3种NAD-IDH不同亚基基因. 同源性搜索发现, 来源于油菜的克隆基因是新基因. 将克隆基因的功能蛋白编码区整合到pMID1多克隆位点, 构建表达重组体, 均能在体外翻译系统中高效地表达出特异目的蛋白. 亚基0, 亚基1和亚基2基因转录本加入到含终浓度为36 μg/mL的二硫键异构酶的体外翻译系统, 体外表达产物中检测到NAD-IDH酶活力. 不同基因种类及转录本分子比的体外表达产物的酶比活力比较表明, NAD-IDH由3种亚基组成, 缺一不可, 缺少亚基0是致命的, 缺少亚基1或2中的任何一个对酶活力的损伤是严重的. 同时发现, 来源于陕2A和陕2B的亚基1基因转录本中存在碱基缺失现象, 从而发生移框突变或无义突变, 使突变亚基不表现正常亚基1功能, 导致油菜品系间叶片NAD-IDH酶比活力存在差异.     

植物GSTZ基因在毕赤酵母中的高效分泌表达

谷胱甘肽S-转移酶zeta类(GSTZ)是一种重要的多功能酶,与细胞生化代谢、环境净化等密切相关.将拟南芥、甘蓝型油菜"陕2B"和"垦C1"的GSTZ基因重组到表达载体pPIC9,电转化到毕赤酵母株GS115中,得到了分泌表达GSTZ酶的毕赤酵母工程菌株.甲醇诱导表达显示,最佳诱导时间在48～60 h,DCA-DC比活力为83.21～115.31 U/mg,GSTZ分泌量为25.71～42.90 U/mL.研究结果表明,植物GSTZ基因在毕赤酵母中的表达是高效的,为大规模发酵生产GSTZ奠定了基础.     

盐度对岐脊加夫蛤幼虫与稚贝的影响

叙述盐度对岐脊加夫蛤Ｇａｆｒａｉｕｍｄｉｖａｒｉｃａｔｕｍ（Ｇｍｅｌｉｎ）幼虫及不同大小稚贝（壳长０．８～１．４ｍｍ）生长和存活的影响．水温３０±１℃时，加夫蛤幼虫阶段的适盐范围为１９．９３‰～３３．２２‰，最适盐度为２２．５９‰．其下限和上限分别为１５．９５‰和３８．５３‰，其存活率低于３０％．水温２５±１℃时，稚贝Ⅰ（壳长０．８～１ｍｍ）适盐度范围为１９．９３‰～３３．２２‰，最适盐度为２２．５９‰；较大稚贝Ⅱ（壳长１．３～１．４ｍｍ）适盐范围为１５．９５‰～３８．５３‰，最适盐度为２５．２４‰，其下限和上限分别为９．３０‰和４５．１７‰．     

龙游县发展高效生态渔业的优势和重点

一、优势产业的布局与建设任务 （一）养蚌育珠 龙游养蚌育珠始于上世纪九十年代，规模逐年扩大。目前全县养蚌育珠水面已达2333．3公顷，约占全县渔业养殖水面的一半左右，年产珍珠105t。龙游已成为衢州市乃至浙江省较有影响的“养蚌育珠主要产区”之一。     

淡水白鲳营养需要量的研究

本文报导用蛋白质梯度试验确定淡水白鲳最适饵料蛋白含量，用生长率为指标求得的结果为２７．２３一３７．４０％；结合蛋白质效率与生长率为指标求得的结果为３１．４２％。在此基础上设计正交试验，用生长比速结合蛋白质效率和饵料系数为评价指标确定每１００ｇ淡水白鲳对蛋白质、糖、脂肪、纤维素和无机盐的日需要量分别为１．５７ｇ、１．８９ｇ、０．３０ｇ、０．１０ｇ和０．２０ｇ。     

阿特拉津氯水解酶基因的定点诱变和酶活力检测

阿特拉津氯水解酶(AtzA)是一种对除草剂的生物降解和环境净化有重要意义的酶．采用定点诱变方法将假单胞菌ADP株的atzA基因第832位碱基(鸟嘌呤)诱变成腺嘌吟，然后将其插入表达载体pET21b( )，并在大肠杆菌中表达．表达的蛋白特性研究表明：AtzA或AtzA—NK融合蛋白系水溶性蛋白，很容易通过Ni—NTA Magnetic Agarose Beads分离纯化．采用阿特拉津脱氯反应产生HCl而引起pH指示剂颜色改变的测定方法能方便地对其酶活力进行定量．酶活力结果表明，突变酶的比活力与假单胞菌ADP菌株的AtzA相比没有明显改变，暗示突变位点(第278位缬氨酸突变成甲硫氨酸)不是酶的活性中心或底物结合部位。     

FAE1启动子的克隆和转γ-TMT基因大豆的获得

脂肪酸链延长酶组分1(FAE1)是广泛存在于植物中催化脂肪酸碳链延长的酮脂酰CoA合成酶,该反应是脂肪酸碳链延长的限速步骤,在油料种子胚中特异性表达.以拟南芥基因组DNA为模板,设计引物,扩增到该基因的启动子片段.序列分析表明,该片段长度为943 bp,与GenBank注册序列AF355982达99.5%同源,并含有与之完全相同的种子特异性表达元件,据此认定它具有种子特异性启动活性.将其与甘蓝型油菜γ-生育酚甲基转移酶(γ-TMT)基因连接,构建成表达载体pFAE1-TMT,通过农杆菌介导的方法转化大豆胚尖,获得28株卡那霉素抗性筛选植株,进一步PCR检测获得2株转γ-TMT基因植株.     

杭州发展双创平台、做优双创载体的对策建议

课题组对北京、上海、杭州、广州、武汉、南京、成都等12个全国主要城市2018-2020年国家级孵化器和国家级众创空间数量进行了摸底调研(如图1、2). 从双创载体的发展趋势可以看出,北京和上海的双创工作起步早,发展较为成熟,这两年规模较为稳定;广州和深圳这两年有较大幅度提升;武汉、南京和苏州等城市起步晚,但这两年发展增...     

黄瓜随机扩增多态DNA(RAPD)研究初报

以异丙醇沉淀法提取的10个黄瓜亲本叶片的总DNA为模板,进行28个10-mer随机引物的RAPD分析,共产生252条带,其中10个引物共产生出21条多态性带,其它18个引物无多态性指纹     

浅谈工程施工进度管理需要注意的问题

工程施工进度管理是工程项目管理中极其重要的组成部分,工程施工进度管理可以降低投资成本,提高企业的经济效益,同时能够有效地保证施工的质量及工程按期完成,因此,如何做好工程施工进度管理关系到整个工程项目的最终完成。针对当前我司建设工程现状,就施工进度管理需要注意的一些问题进行简要的探讨,并提出一些有效的应对策略,对工程施工进度管理具有一定参考意义。