油菜中一未知BnRCH蛋白的E3连接酶活性分析

利用本实验室前期以ATP6为诱饵蛋白,通过酵母双杂交系统筛选到的一个N端含有RINGv结构(RINGvariant)的蛋白,暂命名为BnRCH,构建GTKBnRCH表达载体在原核细胞E.coli BL21(DE3)中高效表达GSTBnRCH融合蛋白,并将纯化的融合蛋白加入体外泛素反应体系,发现BnRCH在ATP、泛素、E1、E2存在的条件下,能催化多聚泛素化形成,具有E3连接酶活性.     

BnRCH同源基因耐热性分析

本实验室先前通过酵母双杂交在油菜中获得一个未知基因(BnRCH),NCBI保守区域查寻表明BnRCH蛋白含有一个RINGv(RING-variant)结构域,该结构参与多种抗逆途径.为初步探索BnRCH的作用,通过RT-PCR技术,克隆BnRCH及其在其它物种中的同源基因cDNA序列,之后将各基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)中进行表达.通过IPTG诱导,western检测表明重组蛋白的相对分子量约为35 kD.进一步在高温环境(43℃)对其生长曲线测定,发现重组菌生长状态优于对照菌,说明BnRCH及其同源基因能提高微生物的耐热性.     

乳源木莲冠层特性与生长的相关及通径分析

对17年生杉木×乳源木莲混交试验林中的乳源木莲冠层特性与材积生长进行相关分析,结果表明:乳源木莲材积指数(VI)与各冠层因子间的相关系数不同,除叶面积指数(LAI)、冠层密度(CLD)外,单株总叶面积(TLA)、树冠表面积(TCA)及冠形率(CSR)与材积指数均达极显著正相关。通径分析表明:TCA对材积生长的直接作用最大(Pyxi=1.201 3),是木莲材积生长的主导因子,TLA、CLD、CSR通过TCA起作用,5个主要冠层参数对乳源木莲材积生长相对重要性的大小顺序依次为TCA,LAI,TLA,CSR,CLD。在分析冠层空间结构对材积生长的影响中发现:垂直方向上,冠层中、下层的叶面积对材积生长有决定性作用;水平方向上,以叶面积多分布于内部、外部的结构有利于乳源木莲材积生长,而中部叶面积的作用较小。     

VDAC3与ABA受体蛋白相互作用的验证以及初步研究

酵母双杂交技术在拟南芥cDNA文库中筛选得到了与ABA受体蛋白RCAR1,RCAR3均有相互作用的蛋白质VDAC3,并已获得VDAC3基因的全长.VDAC3蛋白包含有3个结构域,分别为Porin3结构域,DUF3442结构域和SEG片段,现根据结构域分布,将VDAC3截短为包含DUF3442的VDAC3N以及包含SEG的VDAC3C两段.将VDAC3全长以及分别截短的169个氨基酸(VDAC3N)及105个氨基酸(VDAC3C)的片段进行酵母转化实验,与RCAR1或RCAR3共同转化后,VDAC3,VDAC3N的共转酵母能够在缺陷型培养基上生长,并且使X-Gal显色为蓝色,而VDAC3C则不能.这验证了全长的VDAC3与RCAR1,RCAR3的存在相互作用,并发现决定VDAC3蛋白与RCAR1,RCAR3是相互作用的结构域位于N端的DUF3442结构域.     

油菜中—未知BnRCH蛋白的E3连接酶活性分析

利用本实验室前期以ATP6为诱饵蛋白,通过酵母双杂交系统筛选到的一个N端含有RINGv结构(RING-variant)的蛋白,暂命名为BnRCH,构建GTK-BnRCH表达载体在原核细胞E.coli BL21(DE3)中高效表达GST-BnRCH融合蛋白,并将纯化的融合蛋白加入体外泛素反应体系,发现BnRCH在ATP、泛素、E1、E2存在的条件下,能催化多聚泛素化形成,具有E3连接酶活性.