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黏着斑蛋白Supervillin(SVIL)是一个细胞膜结合蛋白分子,定位于细胞与细胞外基质接触面的黏着斑。为了进一步研究 SVIL蛋白分子在细胞内的功能,应用分子克隆技术构建原核细胞表达质粒 pGEXKG SVILC302和pHIS8 SVILC302,并在细菌 BL 21(DE3)中用 IPTG分别诱导表达 GST SVILC302和 HIS SVILC302融合蛋白。用谷胱甘肽琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化 GST SVILC302蛋白,然后免疫新西兰大白兔制备 SVIL多克隆抗体,并用 Ni NTA柱子结合 HIS SVILC302蛋白,对其进行交联,纯化抗体。WesternBlot(WB)和 Immunofluorescence(IF)实验证明该抗体可以识别外源的 GFP SVIL和内源的 SVIL蛋白,并且可以用于蛋白免疫沉淀实验。表明此SVIL多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度,为进一步研究黏着斑蛋白 SVIL在细胞内的功能奠定了坚实的基础。 相似文献
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