论高校公共英语的教学

论高校公共英语的教学ＳＴＵＤＹＯＮＴＨＥＩＮＳＴＲＵＣＴＩＯＮＩＮＰＵＢＬＩＣＥＮＧＬＩＳＨＯＦＴＨＥＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＣＯＬＬＥＧＥ蔡慧萍ＣａｉＨｕｉｐｉｎｇ（舟山师范专科学校，舟山３１６０００）（ＺｈｏｕｓｈａｎＴｅａｃｈｅｒｓＣｏｌｅｇｅ，Ｚ...     

GST—EGF融合蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化

将小鼠ＥＧＦ基因克隆至谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）融合表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ,转化大肠杆菌ＤＨ５α,获得高效表达,融合蛋白ＧＳＴ－ｍＥＧＦ经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ－ＧＳＨ亲和层析柱纯化和凝血酶消化获得有免疫活性的ｍＥＧＦ,表明ＧＳＴ融合基因表达系统不仅能提高表达产物的稳定性也有利于产物的纯化     

ON PROBLEMS OF THE SPATIAL STATISTICAL ANALYSIS OF QUALITATIVE VARIABLES IN GEOLOGY

ＯＮＰＲＯＢＬＥＭＳＯＦＴＨＥＳＰＡＴＩＡＬＳＴＡＴＩＳＴＩＣＡＬＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦＱＵＡＬＩＴＡＴＩＶＥＶＡＲＩＡＢＬＥＳＩＮＧＥＯＬＯＧＹＬｕｏＪｕｎｆｅｎｇ（ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ,Ｃｈｉｎａ）ＡＢＳＴＲ...     

论高校后勤改革的阶段性与适应性

论高校后勤改革的阶段性与适应性陶根友（浙江水产学院，舟山３１６１０１）ＯＮＳＴＡＧＥＡＮＤＳＵＩＴＡＢＩＬＩＴＹＯＦＬＯＧＩＳＴＩＣＳＲＥＦＯＲＭＩＮＣＯＬＬＥＧＥＴａｏＧｅｎｙｏｕ（ＺｈｅｊｉａｎｇＦｉｓｈｅｒｉｅｓＣｏｌｌｅｇｅ，Ｚｈｏｕｓｈａｎ...     

THE RISE AND DECLINE OF THE UNITED STATES SHIPPING AND SHIPBUILDING INDUSTRIES

ＴＨＥＲＩＳＥＡＮＤＤＥＣＬＩＮＥＯＦＴＨＥＵＮＩＴＥＤＳＴＡＴＥＳＳＨＩＰＰＩＮＧＡＮＤＳＨＩＰＢＵＩＬＤＩＮＧＩＮＤＵＳＴＲＩＥＳ￥（ＣａｐｔａｉｎＪａｍｅｓＳ．Ｃ．Ｃｈａｏ，ＤＣＳ，ＬＬ．Ｄ．ＪｏｈｎＪ．Ｃｌａｒｋ，Ｐｈ．Ｄ．）Ａｂｓｔｒａｃｔ...     

LARGETIMEBEHAVIOROFSOLUTIONSTOACHEMICALREACTION┐DIFFUSIONSYSTEM

ＬＡＲＧＥＴＩＭＥＢＥＨＡＶＩＯＲＯＦＳＯＬＵＴＩＯＮＳＴＯＡＣＨＥＭＩＣＡＬＲＥＡＣＴＩＯＮ┐ＤＩＦＦＵＳＩＯＮＳＹＳＴＥＭＪｉａｎｇＣｈｅｎｇｓｈｕｎＸｉｅＣｈｕｎｈｏｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭａｔｈｅｍａｔｉｃｓ，ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖ...     

千岛湖黄尾密鲴年龄与生长的初步研究

千岛湖黄尾密鲴年龄与生长的初步研究ＯＮＡＧＥＡＮＤＧＲＯＷＴＨＯＦＹＥＬＬＯＷＴＡＩＬＳＩＬＶＥＲＹＣＨＶＢＩＮＱＩＡＮＤＡＯＬＡＫＥ罗仙池ＬｕｏＸｉａｎｃｈｉ（浙江省淳安县水产局淳安３１１７００）（Ｃｈｕｎ－ａｎＣｏｕｎｔｙＦｉｓｈｅｒｉｅｓｂｕｒ...     

HARMONIC AC SUSCEPTIBILITY FOR TEXTURED YBa_2Cu_3O_7

ＨＡＲＭＯＮＩＣＡＣＳＵＳＣＥＰＴＩＢＩＬＩＴＹＦＯＲＴＥＸＴＵＲＥＤＹＢａ２Ｃｕ３Ｏ７ＧｅＹｏｎｇ１）ＤｉｎｇＳｈｉＹｉｎｇ２）（１）ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｃｓ,ＮａｔｉｏｎａｌＬａｂｏｆＳｏｌｉｄＳｔａｔｅＭｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒ...     

大片吸虫谷胱甘肽S-转移酶的提纯及生化分析

用谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析法从中国广西水牛源大片吸虫（Ｆａｓｃｉｏｌａｇｉｇａｎｔｉｃａ）成虫体内提纯大片吸虫谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＦｇＧＳＴ）。提纯的ＦｇＧＳＴ在１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现二条清晰谱带,分子量分别为２６．５ｋＤ和２８ｋＤ。以ＣＤＮＢ为标准底物测得ＦｇＧＳＴ的活力为１７．０８μｍｏｌ／ｍｉｎｍｇ。用谷胱甘肽亲和层析柱纯化的ＦｇＧＳＴ,不仅纯度好,而且获得率高,所得ＦｇＧＳＴ至少占上柱上清液总蛋白含量的３．１％。     

贝类生长研究中的稳健估计方法

贝类生长研究中的稳健估计方法杨晓平（浙江水产学院基础课部，舟山３１６１０１）ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＯＦＲＯＢＵＳＴＥＳＴＩＭＡＴＩＯＮＩＮＲＥＳＥＡＲＣＨＯＦＳＨＥＬＬＦＩＳＨＧＲＯＷＩＮＧＹａｎｇＸｉａｏｐｉｎｇ（ＧｅｎｅｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓＥｄ...     

AhAO2融合蛋白表达、纯化与抗体制备

构建AhAO2基因片段原核表达重组质粒pPROEX-Hta-AhAO2,表达质粒在E.coliBL21中诱导表达,获得His-AhAO2融合蛋白,采用亲和层析与电泳纯化His-AhAO2免疫,新西兰大白兔,获得抗His-AhAO2抗体,West-ern blot检测显示其只与His-AhAO2融合蛋白结合.实验成功制备了抗AhAO2特异抗体.     

花生AhAO2基因融合表达、纯化与抗体制备

研究构建AhAO2基因片段原核表达重组质粒pPROEX-Hta-AhAO2的实验结果显示,重组pPROEX-Hta-AhAO2表达质粒在E.coli BL21中高表达His-AhAO2融合蛋白,采用亲和层析与电泳纯化His-AhAO2免疫新西兰大白兔,获得抗His-AhAO2抗体,Western blot检测显示其只与His-AhAO2融合蛋白结合.实验成功制备了抗AhAO2特异抗体.     

盘基网柄菌allC的克隆、表达和多克隆抗体的制备

运用RT-PCR技术从盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)总mRNA中克隆到了尿囊酸酶基因(allC),该基因编码区开放读框长1 100bp,编码的蛋白约42kD.由于是在野生型和突变型细胞中差异表达的片段,表明该基因在盘基网柄菌多细胞发育中起到重要作用,因此将allC克隆入融合表达载体pET-32a(+),在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中进行诱导表达带有6个组氨酸标签的尿囊酸酶(ALC)融合蛋白,经镍柱亲和层析,获得了电泳纯蛋白.用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.ELISA测得制备的抗ALC蛋白的多克隆抗体的效价可达1∶64 000,Western Blotting检测证明该抗体有较强的针对ALC蛋白的专一性.这些数据表明重组质粒表达的ALC融合蛋白具有良好的抗原性,制备ALC的多克隆抗体有良好特异性和效价,能够满足针对ALC免疫印迹和细胞内定位检测等实验要求,为深入研究ALC蛋白在盘基网柄菌多细胞发育的功能作用提供了有力工具.     

AK078438基因原核表达载体构建、多克隆抗体制备

AK078438基因是一个功能未知的新基因.通过RT-PCR方法扩增出AK078438基因的全长开放阅读框,构建了AK078438基因的原核表达载体.经诱导表达,亲和层析纯化该基因的融合蛋白并制备多克隆抗体.ELISA和Western blot结果表明我们成功的制备了AK078438基因的抗体,为后续该基因功能的研究做好了准备.     

重组猪生长激素抗体的制备与纯化

为了获得重组猪生长激素抗体,对重组猪生长激素融合基因的真核表达产物进行免疫印迹(Western blot)检测,将利用DNA重组技术构建的重组质粒pPGH020在大肠杆菌(E.coli)BL21中进行诱导表达.表达产物经Ni+亲和层析柱纯化,获得纯化的重组猪生长激素融合蛋白.然后以此为抗原免疫新西兰大白兔,获得多克隆抗体,抗体再经硫铵沉淀、透析和亲和层析纯化.Western印迹结果表明,该纯化抗体显示了良好的免疫反应,其灵敏度比兔抗rpGH抗血清提高50倍,为猪生长激素融合基因在真核细胞的表达及功能鉴定奠定了基础.     

DSCR1抗体制备与应用

本实验利用Fmoc固相多肽合成的方法合成DSCRI氨基端一个多肽片段(55-70AA),经HPLC纯化后偶联到匙孔槭血蓝蛋白,免疫新西兰雄兔后采血检测、纯化、经Westem blotting、免疫沉淀证实得到的抗体为抗DSCR1的特异抗体。谊抗体即能检测人源DSCR1蛋白,又能检测小鼠的DSCR1蛋白。运用获得的DSCR1多克隆抗体进行功能研究。发现DSCR1广泛存在泛素化,参与泛素化-蛋白酶体途径。     

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的克隆、 表达及多克隆抗体制备

利用原核系统表达牛病毒性腹泻病毒（BVDV）E2蛋白, 制备鼠源多克隆抗体. 通过MDBK细胞增殖病毒, 提取RNA, RT-PCR扩增E2全长基因, 进行生物信息学分析后设计截短引物, 构建优化表达载体pET-30-E2, 转化BL21, 用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达; 用SDS-PAGE电泳分析蛋白表达, 纯化蛋白联合弗氏佐剂免疫小鼠; 用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定抗体效价水平, 用免疫印迹(WB)和免疫荧光(IFA)法验证抗体特异性. 结果表明: E2基因在大肠杆菌中成功表达, 蛋白大小为32 000, 不可溶形式表达, 表达量为0.4 mg/mL; 多克隆抗体效价为1∶256 000, 可特异性结合重组蛋白及细胞中的病毒.     

人NEDD8 原核表达及兔高免血清制备

摘要: 本研究根据基因比对,将合成的nedd8 基因( HN8) 酶切克隆入pCold-TF 原核表达载体中,命名为pCold-HN8,转化到感受态宿主菌BL21( DE3) 中,加入不同浓度异丙基硫代半乳糖苷( IPTG) 于16℃中诱导表达24 h,超声波裂解,通过His-bind 纯化试剂盒纯化,分别进行SDS-PAGE 检测,结果HN8 蛋白获得可溶性表达,融合蛋白大小为64 kDa。用纯化的蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,经Western Blot 和间接免疫荧光试验证实,兔抗HN8 蛋白的血清能够特异性识别HN8 蛋白。这为进一步研究HN8 蛋白在Neddylation 通路中的修饰作用奠定了基础。     

利用多克隆抗体检测纺锤体蛋白基因INMAP在肝癌细胞中的表达

 为探究纺锤体蛋白INMAP 的功能及其在细胞恶性增殖中发挥的作用,制备INMAP 多克隆抗体.利用0.1 mmol/L IPTG于16℃诱导His-INMAP 融合蛋白进行原核表达,SDS-PAGE 及免疫印迹检测蛋白表达.4.0 mol/L 尿素处理包涵体获得可溶性融合蛋白,镍亲和柱分离纯化融合蛋白抗原并检测蛋白浓度及纯度.以所获抗原免疫4 只Balb/c 小鼠,收集心脏抗血清.以纯化前、后的原核表达产物作为抗原,检测INMAP 多克隆抗体的特异性.通过免疫印迹分析INMAP 在正常肝细胞系L-02 及5个肝癌细胞系(PLC、HepG2、SUN449、SMMC-7721 和BEL-7402)中的表达差异.结果显示,His-INMAP 融合蛋白主要以包涵体形式存在,经4.0 mol/L 尿素处理可获得可溶性目的蛋白,且纯化后的抗原纯度较高(94.1%).INMAP 多克隆抗体能与INMAP 抗原特异结合.INMAP 在6 种肝细胞中具有多态性,除PLC 外,在其他肝癌细胞中其基因表达水平显著下调.本研究制备的INMAP 多克隆抗体特异性高,为INMAP 基因功能的进一步研究奠定了基础.