日本沼虾基因片段PCR扩增的条件优化

以日本沼虾肌肉组织为材料，提取其基因组DNA，研究了该虾16S rRNA基因片段扩增的PCR反应条件.经对扩增反应体系中各因子和扩增程序的梯度实验，确定优化反应条件为: 在25μL反应体系中，10×Buffer 2.5 μL，DNA模板200～300 ng，4×dNTP 0.2 mmol/L，Mg²⁺1.5 mmol/L，引物0.4μmol/L，Taq DNA聚合酶1 U，95 ℃预变性5 min；接着35个循环包括95 ℃变性1 min，56 ℃复性50 s，72 ℃延伸1 min；最后72 ℃延伸10 min.应用此优化体系扩增日本沼虾18S rRNA，细胞色素氧化酶亚基I (cytochrome oxidase subunit I, COI),NADH脱氢酶亚基V (NADH dehydrogenase subunit 5, ND5)等基因片段均获得了稳定而理想的效果.研究结果为深入探讨日本沼虾种群的遗传和变异,以及开展其种质鉴定和分子标记等研究提供了参考.