传染性非典型肺炎病毒核蛋白的表达与活性检测

用PCR方法，人工合成传染性非典型肺炎病毒(SARS-CoV)核蛋白(N)全编码基因，并构建原核表达载体．在大肠杆菌中进行表达．结果重组N蛋白表达产量占菌体总蛋白的40％以上，主要以可溶形式存在．用SARS患者急性期血清进行蛋白印迹检测，表明可溶形式和包含体形式均有明显活性．包含体形式的重组蛋白经纯化后纯度可达90％以上，活性与纯化前相当，可作为SARS抗体诊断试剂盒的抗原原料．     

梅毒螺旋体47ku抗原的分段表达及抗原表位分析

通过大肠杆菌表达系统表达了梅毒螺旋体47 ku膜蛋白及其N端和/或C端缺失的重组蛋白共15个,经亲和层析纯化,并通过免疫印迹和酶联免疫实验检测这组蛋白与梅毒病人血清的反应性.结果发现所有包含D结构域的重组蛋白的免疫反应性显著高于不含D结构域的蛋白,提示D结构域中可能包含47 ku膜蛋白上的一个免疫优势表位.     

高灵敏度巢式PCR方法扩增HBV全长基因组

探讨一种用于乙型肝炎病毒(HBV)基因组扩增的灵敏度高、广谱性好的巢式聚合酶链式反应(nested PCR)方法,适用于较低病毒拷贝数标本的HBV DNA扩增.通过设计两套通用巢式引物,实现对各基因型(A,B,C,D,E,G)HBV均具有较高的扩增效率;采用两步法分段扩增HBV基因组,对两段目的产物进行测序拼接获得HBV的全基因序列.应用本方法对4组病毒拷贝量(IU/mL)分别为:>1.0×104,1.0×103~1.0×104,2.0×102~1.0×103,<2.0×102的100份血清标本进行全长基因组扩增,其中75份获得阳性结果,各组阳性率依次为:100%,66.7%,60%,25%,有效扩增灵敏度为2.0×102~1.0×103IU/mL;而一步法只在病毒拷贝量>1.0×104IU/mL的标本组中获得15份阳性结果,总的阳性率仅为15%,说明该方法扩增灵敏度明显高于一步法.因此,本方法为HBV流行病学调查研究HBV基因组序列提供了更高的灵敏度,可在流行病学调查中发挥重要作用.     

戊型病毒性肝炎研究进展

戊型病毒性肝炎是全球最主要的病毒性肝炎之一,近半个世纪多次发生大规模暴发,孕妇感染戊型肝炎后病死率高达20%.近年随着基于构象型表位多肽E2的戊型肝炎诊断试剂的出现,戊型肝炎的病原学诊断及流行病学调查均获得了较大的发展,越来越引起人们的重视.由我国自主创新研制的重组戊型肝炎疫苗现已在中国完成世界上首个Ⅲ期临床试验,其预防戊型肝炎的保护率达到100%(95%CI,72.1%~100.0%).     

对流实时荧光定量PCR系统设计

设计了一种结合实时荧光定量技术和自然对流技术的PCR系统.主要介绍该系统的双通道荧光激发与检测结构及其工作原理,系统中使用光纤作为光路的传输媒介,采用电荷耦合元件(CCD)工业相机采集荧光信号变化,并自行设计电路和软件驱动整套系统正常运行.最后通过对梯度稀释的巨细胞病毒(CMV)的基因模板进行扩增,展示了该系统可用于快速扩增和实时定量检测的潜力.