大鼠前列腺间质增生模型的建立

为建立前列腺间质增生的动物模型,将大鼠随机分为假手术组、去势组、去势 雄激素组、去势 雌激素组、去势 不同比例的雌/雄激素组(1∶50,1∶100,1∶200,1∶300),考察各实验组的前列腺指数、组织切片的形态学和平滑肌特异蛋白免疫组化染色的变化.结果表明与正常组比较,凡施用雌/雄激素组的前列腺指数均明显增高,以1∶100和1∶200组尤为明显.去势 不同比例雌/雄激素组较正常组的前列腺组织增生明显,而且间质中平滑肌细胞成分在雌/雄激素比例为1:100组明显增加.因此,用雌/雄激素协同作用诱导大鼠前列腺间质增生的最佳比例为1∶100.     

前列腺癌风险性SNP rs55958994相关的增强子座位促进lncRNA HOTAIR表达增强肿瘤细胞迁移能力

长链非编码RNA(lncRNA)在恶性肿瘤发生发展中发挥重要的作用,其中lncRNA HOTAIR已经被证实能够促进多重肿瘤的转移.前期研究通过全基因组关联研究(GWAS)发现,12号染色体长臂13区13带(12q13.13)的SNP位点rs55958994是前列腺癌独立风险因子,通过生物信息学分析发现含有该风险性SNP的染色体座位是一个潜在的增强子元件,在22Rv1细胞系中敲除该增强子座位发现肿瘤细胞的转移侵袭能力明显降低;采用Capture-C实验结合基因表达谱分析发现该增强子元件通过染色质长距离相互作用调节lncRNA HOTAIR的表达;进一步采用细胞分子生物学实验证实HOTAIR是该风险性增强子影响肿瘤进展的关键基因之一.     

丹参酮IIA与雷洛昔芬联合用药对大鼠前列腺增生防治作用的实验研究

良性前列腺增生(BPH)是引起老年男性排尿障碍的常见疾病.本研究在雌雄激素诱导大鼠前列腺增生模型基础上,探究丹参酮IIA与雷洛昔芬联合用药对大鼠前列腺增生的防治作用.结果表明,与模型组相比,丹参酮IIA与雷洛昔芬联合用药显著抑制大鼠前列腺体积增大,降低前列腺指数,同时减少前列腺上皮和间质细胞中雄激素受体(AR)和雌激素受体α(ERα)的表达;与单独用药组相比,联合用药的治疗作用显著优于单独用药.提示,在大鼠前列腺上皮和间质细胞中,丹参酮IIA与雷洛昔芬联合用药可能通过同时降低细胞中AR和ERα表达抑制细胞增殖.     

普通棉耳狨猴中乙型流感病毒的分离和鉴定

乙型流感病毒是引起人类局部流行性感冒的重要病原体，其起源和自然储存宿主目前仍不清楚。1999年夏季在某动物中心饲养的普通棉耳绒猴（Callithrix jacchus）群体中爆发了以呼吸道症状为主的急性传染病，死亡比率高达1／3。通过对死亡狨猴肺组织匀浆接种鸡胚和MDCK细胞的分离培养，分离出病毒。双份血清的红细胞凝集抑制试验证实，此分离株为此次狨猴群体感染流行的病原体。通过甲型和乙型流感病毒标准血清鉴定，证实该分离株为乙型流感病毒，命名为B/marmoset/China/1/99。     

含有肌球蛋白重链启动子的p-EGFP1质粒的构建

从前列腺组织中提取总DNA，以其为模板经PCR扩增得到肌球蛋白启动子，将扩增片段和处理好的p—EGFP1载体相连，连接产物转入到大肠杆菌HB101中，经筛选得到连有myosin启动子的p—EGFP1重组质粒．用酶切和PCR的方法对重组质粒进行鉴定．成功构建的质粒可用于前列腺平滑肌细胞和成纤维细胞的分离，这将对于阐明前列腺基质增生的机理起到重要作用．     

TGFβ1介导雌二醇对前列腺间质细胞smoothelin表达的促进作用

研究了雌激素在促进前列腺基质细胞化过程中作用的分子机制.在前列腺基质细胞培养液中分别添加TGFβ1,雌二醇、雌二醇和ICI182.780、睾酮、睾酮和芳香化酶抑制剂、双氢睾酮、雌二醇和TGFβ1中和抗体;用半定量RT-PCR的方法检测基质细胞中平滑肌细胞特异蛋白smoothelin和TGFβ1 mRNA的表达水平;用ELISA测定基质细胞培养基中TGFβ1的浓度.结果显示TGFβ1可明显促进smoothelin的表达;雌二醇和睾酮能明显刺激TGFβ1基因和蛋白的表达水平,而雌激素受体抑制剂ICI182.780和芳香化酶抑制剂可分别抑制雌二醇和睾酮对TGFβ1表达的促进作用;双氢睾酮对TGFβ1基因的表达没有影响.TGFβ1中和抗体能抑制雌二醇对smoothelin的促表达作用.结果显示雌二醇可能通过诱导TGFβ1促进前列腺平滑肌细胞特异蛋白smoothelin的表达.     

含有前列腺癌风险性SNP rs10486567位点潜在增强子座位在前列腺癌细胞中功能的研究

遗传是前列腺癌发展成临床型疾病的重要危险因素.前期采用生物信息学分析发现,7号染色体短臂15区2带(7p 15.2)的SNP rs10486567是前列腺癌的独立风险因子,并发现该SNP位点定位于一个潜在增强子内部.本研究通过CRISPR-Cas9技术在22RV1细胞系中敲除该增强子座位后发现肿瘤细胞迁移能力显著降低;并利用Capture-C技术结合RNA-seq方法,发现该增强子座位与约800 kb外的HOXA基因区段存在远距离染色质相互作用,并调控HOXA基因簇的表达.研究提示含有风险性SNP rs10486567的增强子区段调控HOXA7、HOXA4等基因的表达,进而影响肿瘤细胞的恶性转移进程.     

RasGRP3维持脑胶质瘤对替莫唑胺敏感性的研究

口服替莫唑胺(TMZ)是用于治疗神经胶质瘤的一线化学疗法.然而,在治疗过程中许多胶质瘤表现出对替莫唑胺的抗性, 进而导致治疗失败,疾病进展,最终导致死亡.在这项研究中,基因RasGRP3使胶质瘤细胞表现出对替莫唑胺的敏感性.首先,通过对野生型对照组胶质瘤细胞系(DMSO-U251)和替莫唑胺处理后存活的胶质瘤细胞系(TMZ-U251)进行RNA-seq数据的差异表达分析,结合脑胶质瘤信号通路分析,发现鸟嘌呤核苷酸交换因子RasGRP3表达水平显著改变.使用CRISPR/Cas9敲除RasGPR3的功能结构域,可以增加脑胶质瘤对替莫唑胺的敏感性以及降低脑胶质瘤的增殖能力.研究结果表明,RasGRP3通过促进脑胶质瘤的增殖从而对替莫唑胺表现抗性.     

实时定量PCR技术检测前列腺癌微小转移的研究

通过利用TaqMan定量PCR检测前列腺增生和前列腺癌患者外周血中前列腺特异抗原(PSA)和前列腺特异膜抗原(PSMA)的表达量,建立了一种通过检测患者外周血单个核细胞中前列腺特异基因表达水平检测前列腺癌微小转移的方法.实验结果表明,PSA在转移癌、局限癌和增生患者组中与GAPDH的相对表达量分别为(2.63×10-3±3.4×10-4),(2.6×10-4±3.9×10-5)和(2.6×10-5±4.5×10-6),各组间有显著性差异(p＜0.001);PSMA在各组间的相对表达量分别为(6.4×10-3±9.3×10-3),(5.0×10-4±8.3×10-5),(2.4×10-5±7.2×10-6),各组间亦存在着显著性差异(p＜0.001).因此用定量PCR技术检测外周血中PSA和PSMA的表达水平,可区分前列腺转移癌、局限癌和增生患者,该方法可用于前列腺癌的早期诊断.     

新基因BP1抗体制备及其在乳腺癌表达的初步观察

为了探讨新同源盒基因BP 1在乳腺癌的表达,运用生物信息学方法设计19肽,合成并偶联到大分子载体KLH上制成人工免疫原,制备兔抗BP 1多克隆抗体IgG.蛋白印迹方法检测BP 1在乳腺癌细胞系M CF 7、M DA-M B-231细胞均有表达:免疫组织化学结果显示,BP 1蛋白在乳腺癌的表达率显著高于癌旁组织,在雌激素受体阴性肿瘤的表达率高于雌激素受体阳性组。BP 1基因的异常表达参与了乳腺癌的发生,是一种新的乳腺癌分子标志物.