细胞骨架与早期基因mRNA定位的相关性研究

近年来利用高压电子显微镜、组化、生化和冰冻蚀刻等技术发现了一些mRNA,多聚核糖体及蛋白转译延伸因子在细胞骨架上的定位。蛋白转译机构在细胞骨架上的定位,提示细胞骨架可能与基因表达有关。早期基因c-jun,c-fos,c-mys的产物都是转录因子,对Go至S期有重要调节作用。Zambetti等发现微丝解聚剂——细胞松弛素D（Cytochalasin D,CD）可刺激Hela细胞。c-fos的转录活性,并发现问期细胞中80％的c-fos mRNA与细胞骨架相结合,而CD处理使微丝解聚后,70％以上的mRNA出现在可溶相中, 但微丝解聚剂对C-jun,C- myc的转录活性是否有影响,其mRNA是否与细胞骨架相结合,迄今尚未见报道,本文利用     

PKA和PKC对HeLa细胞G2/M/G1进程的影响

为了研究ＰＫＡ和ＰＫＣ对ＨｅＬａ细胞Ｇ２→用Ｍ→Ｇ１期进程的影响,用ＰＫＡ和ＰＫＣ抑制剂分别处理同步的Ｇ２期和Ｍ期的ＨｅＬａ细胞后,测定了细胞有丝分裂指数和ＰＫＡ,ＰＫＣ与ＣＤＣ２激酶的活性。     

钙调素拮抗剂TFP对Hela细胞微丝及波形纤维蛋白分布的影响

利用钙调素拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）及微管的不同聚合状态对Ｈｅｌａ细胞微丝及波形纤维蛋白分布的影响进行了研究。Ｈｅｌａ细胞微丝明显解聚，而波形纤维蛋白则密集分布在细胞核一侧。细胞经ＴＦＰ处理２ｄ后，可见微丝分布的恢复，而波形纤维蛋白分布则变得分散，并向质膜延伸。但对ＴＦＰ处理２ｄ后的细胞用低温（２～４℃）处理，使微管解聚，或以紫杉酚（ｔａｘｏｌ）处理２４ｈ，使微管高度聚集以破坏其微管网络系统时，微丝则随之发生明显的解聚现象，而波形纤维蛋白又恢复为密集分布于细胞核一侧的状态。若在低温处理前加ｔａｘｏｌ预处理１．５ｈ，以稳定微管时，此时在细胞周边仍可见微丝存在，波形纤维蛋白仍保持其分散分布状态。结果表明经ＴＦＰ处理的Ｈｅｌａ细胞微丝及波形纤维蛋白分布的变化可能与微管分布的改变具有一定的联系。     

v-src,Ca~(2+),PKC和cAMP对3T3-tsLA90细胞间隙连接通讯的调节

以3T3-tsLA 90细胞为正常和转化细胞模型,采用划痕标记染料示踪技术,初步研究了 v-src 基因及 Ca~(2+)-钙调素,蛋白激酶 C,cAMP 等细胞内信号物质对细胞间隙连接通讯的调节作用.40℃时正常表型的细胞间隙连接通讯正常,33℃时转化表型的细胞间隙连接被阻断.用 v—src 基因产物抑制剂、钙通道抑制剂、钙离子载体、钙调素和蛋白激酶 C 抑制剂及 cAMP研究了对细胞间隙连接的作用.当3T3-tsLA 90细胞由40℃转移到33℃时,v-src 基因活化,其产物 pp 60~(v-s c)通过 Ca~(2+)-CaM 和 DG-PKC 通路及 cAMP 系统相互作用对细胞间隙连接通讯功能起下降调节作用,从而导致细胞呈转化表型状态.     

PKA和PKC对HeLa细胞G_2/M/G_1进程的影响

为了研究PKA和PKC对HeLa细胞G2 →M期和M→G1期进程的影响 ,用PKA和PKC抑制剂分别处理同步的G2 期和M期的HeLa细胞后 ,测定了细胞有丝分裂指数和PKA ,PKC与CDC2激酶的活性 .结果表明 ,PKAⅢ型抑制剂在促进HeLa细胞G2 /M /G1进程的同时 ,刺激了PKC的活性 ,反之 ,PKC的抑制剂GF 10 92 0 3X在阻抑HeLa细胞G2 /M /G1进程的同时 ,激活了PKA的活性 ,与其相关的CDC2激酶活性也发生了相应的变化 .实验表明 ,PKA和PKC分别负调和正调HeLa细胞G2 /M/G1进程 ,两者表现出拮抗关系 .     

小鼠Friend细胞诱导分化过程中对纤粘蛋白亲和性的研究

实验中观察到外源性纤维粘连蛋白(FN)可明显增强小鼠Friend红白血病(MEL)细胞的贴壁和铺展,许多细胞的形态改变为梭形,成纤维细胞样及上皮细胞样等类型,外源性FN可诱导MEL细胞微丝的恢复,微丝的恢复与使细胞增强贴壁和铺展有密切联系.外源性FN诱导MEL细胞贴壁和铺展以及表型改变的机理在于其细胞表面的FN受体与外源性FN的结合反应.但MEL细胞经HMBA诱导分化后,则丧失对外源性FN在细胞贴壁、铺展、表型改变及恢复微丝组装等方面的能力.这种差别可以为鉴别细胞转化和分化提供一种依据,并为进一步研究细胞转化与外基质之间相互关系及其机理提供线索.