六种核酸提取试剂盒对粪样中小鼠肝炎病毒核酸 提取效率的比较

目的 比较六种商品化试剂盒在小鼠粪便中提取小鼠肝炎病毒(MHV)RNA的效率,筛选出效率高、耗时短的核酸提取方法。方法 采集感染MHV小鼠的新鲜粪便样本,分别用液氮研磨法、磁珠匀浆法以及PBS溶解离心法进行处理,通过同一核酸提取试剂盒比较病毒核酸提取效率,明确最佳样本前处理方法;之后,用6种试剂盒进行RNA提取,经反转录后进行TaqMan实时定量PCR检测,以Ct值评价6种试剂盒的提取效率,结合产物测序和血清抗体ELISA结果,筛选MHV的最佳核酸提取方法。结果 对于粪便样本的前处理,液氮研磨法的RNA提取效率显著高于磁珠匀浆法。对于6种试剂盒的提取效果,TIANGEN DP422[总RNA浓度：(549.70±52.38) ng/μL,Ct值：(24.51±0.10)]核酸提取效率最高;TIANGEN SD101[总RNA浓度：(274.13±6.87) ng/μL,Ct值：(2.39±0.017)]和QIAGEN 52904[总RNA浓度：(288.13±15.11) ng/μL,Ct值：(2.40±0.012)]用时最短;XS VRL[总RNA浓度：(348.80±15.85) ng/μL,Ct值：(24.70±0.13)]操作最为方便。结论 粪便样本前处理建议采用液氮研磨法。针对粪便中MHV RNA的提取,TIANGEN DP422提取效率最高,推荐用于小鼠肝炎病毒的分子生物学检测。     

正常成年CBA小鼠短声诱发听性脑干反应测试波形分析

目的:利用不同频率短声刺激正常CBA小鼠,诱发听性脑干反应(Auditory brainstem responses,ABR),分析各波形出现频率、潜伏期、阈值和幅值,找出最适合用于检测CBA小鼠阈值的ABR波,为CBA小鼠听觉研究提供参考依据。方法:对50只CBA小鼠进行短声(click声)诱发ABR测试,分别观察高(90 d B SPL)、中(60 d B SPL)、低(30d B SPL)3个刺激强度下波Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的出现率,阈值的判断使用出现率最高的波,并测量其的潜伏期和幅值。结果:(1)在高中低三个刺激强度下波Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ的引出率分别是100%、100%、100%、100%、65%,100%、100%、100%、100%、59%,95%、97%、65%、55%、45%;发现波Ⅱ的引出率最高并且最稳定,相比较其他波而言最适合用来判断反应阈值,其平均阈值为30 d B SPL;(2)观察发现从90 d B SPL逐渐降低到30 d B SPL时,波Ⅱ的潜伏期在2.08~2.35 ms之间,幅值在2.15~1.62μV之间。结论:CBA小鼠短声诱发ABR波Ⅱ引出率最高且最稳定,引出波Ⅱ的刺激声强度应作为其反应阈值的参考标准。     

基于小鼠肝炎病毒研究遗传工程小鼠隔离检疫设计

目的以小鼠肝炎病毒(MHV)为例,研究两种常用小鼠感染MHV后粪便中病毒核酸检测量与血清特异性抗体的变化,探讨实验动物病原微生物感染的检测设计。方法用MHV病毒核酸检测阳性的脏垫料持续饲养C57BL/6和BALB/c小鼠(n=20) 28 d,进行脏垫料接触感染。之后所有小鼠使用无菌垫料进行单笼饲养,每周收集新鲜粪便和血清样本,经Taqman荧光定量PCR(qPCR)和ELISA法检测后进行统计分析。结果对于BALB/c小鼠,采用qPCR法检测时,在实验第21天即有阳性检出(阳性率20%),第28天阳性检出率达到最高,为80%,第42天阳性检出率为50%,至第56天无阳性检出。血清ELISA检测发现,实验第42天才有MHV特异性抗体检出(阳性率为50%)。对于C57BL/6小鼠,采用qPCR法检测时,在第28天和第42天分别从20%小鼠粪便中检出MHV。而采用ELISA法在整个实验期均未检出特异性阳性抗体。结论在隔离检疫和常规病原检测中,建议选用BALB/c小鼠作为哨兵鼠,替代C57BL/6小鼠。由于qPCR法具有早检出和更高检出率的优点,建议在隔离检疫早期采用基于分子生物学的粪样核酸检测法替代ELISA法。     

快速建立CBA小鼠急性耳毒性模型的研究

目的 利用硫酸卡那霉素(Kanamycin sulfate,KM)与呋塞米(furosemide,Fur)快速建立CBA小鼠急性耳毒性动物模型,观察给药时间对致聋的影响。方法 1、利用KM+Fur联合用药快速建立急性耳毒性动物模型:60只5~8周龄的健康CBA小鼠(雌雄各半)随机平均分成6组:正常组(空白对照)、KM+Fur联合用药后1 d组、用药后3 d组、用药后7 d组、用药后14 d组、用药后28 d组;2、在KM+Fur用药前和用药后1、3、7、14、28 d不同时间段检测运用听性脑干反应测试(auditory brainstem response,ABR)进行听力阈值及ABR波Ⅱ振幅分析;3、各组小鼠通过耳蜗基底膜HE染色铺片显微镜下观察小鼠耳蜗基底膜病理切片中毛细胞缺失和排列情况。结果 1、CBA小鼠联合运用KM+Fur后各时间点的ABR阈值与给药前相比,听力阈值明显升高,差异具有统计学意义(0.01);2、CBA小鼠联合运用KM+Fur后各时间点的ABR波Ⅱ振幅值与给药前相比较,幅度降低明显,差异具有统计学意义(0.01)3、CBA小鼠联合运用KM+Fur 1 d后,外毛细胞出现轻微的紊乱,随着损伤时间的延长,耳蜗外毛细胞的排列越来越紊乱;4、CBA小鼠联合运用KM+Fur后在不同时间段的ABR听力阈值及ABR波Ⅱ振幅值比较,差异均无统计学意义(0.05)。结论 硫酸卡那霉素和呋塞米联合一次给药,可以快速建立理想的CBA小鼠急性耳毒性模型。     

学制“三改二”后硕士生创新能力的培养

研究生教育的质量备受关注,创新能力的培养是其质量的重要保障然而,正在我国悄然兴起的硕士研究生"三改二"学制改革浪潮会不会使已备受批评的研究生教育"雪上加霜"?怎样确保在"三改二"学制下硕士生的培养质量?如何强化其创新能力?针对这些问题进行了讨论,并提出一些强化两年制硕士生创新能力培养,确保研究生培养质量的建议