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本研究旨在挖掘新的具有可编码核酸切割活性的Argonaute（Ago）核酸酶。利用已报
道的Ago核酸酶的氨基酸序列在NCBI中进行序列比对获得同源性较高的新型Ago蛋白作为候选
蛋白;以大肠杆菌为异源表达系统,对候选蛋白的基因进行密码子优化;表达后的目的蛋白利用亲
和层析进行分离和纯化;设计核酸定向切割体系以测试纯化蛋白的可编码核酸酶活性。结果显
示,序列比对共获得4个候选Ago蛋白,均可在大肠杆菌中可溶表达,再通过亲和层析得到了高纯
度的目的蛋白;纯化后的4个候选Ago蛋白经测试均具有可编码核酸内切酶活性。本研究建立的
Ago核酸酶的挖掘和体外活性表征的方法,可高效获取新型Ago,对于后继Ago核酸酶的研究工作
具有借鉴和参考价值。 相似文献
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