鳞翅目昆虫细胞抗菌肽的诱导、筛选及抗菌活性的研究

选取3种离体培养的鳞翅目昆虫细胞系，采用热灭活的大肠杆菌诱导的方法，诱导其产生抗菌肽，并进行抗菌活性检测、诱导动力学研究及Tricine SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析．结果筛选到1株诱导抗菌活性较高的昆虫细胞系——粉纹夜蛾BTI-Tn-5B1细胞系，并发现该粉纹夜蛾5B1细胞在诱导后16h产生了1个分子量大约为8000的抗菌肽，抗菌活性检测表明其对金黄色葡萄球菌（Sta phylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli K12D31）、德氏卑沙门氏菌（Salmonella derby）均有不同程度的抑制作用，其中特别是对革兰氏阴性菌——大肠杆菌K12D31和德氏卑沙门氏菌有较强的抑菌活性．     

对虾白斑症病毒的初步研究

对虾白斑症病毒可通过人工投喂感染克氏螯虾,病和发展迅速,死亡率高。该病毒既可见在胞核中复制,也常见于胞质中装配。通过差速离心,蔗糖垫层离心或密度梯度离心后,再将分离物中细胞源核酸消化掉,可提取出较纯的病毒ＤＮＡ。     

大肠杆菌β－半乳糖苷酶基因在小菜蛾细胞中的表达

用携带大肠杆菌β－半乳糖苷酶（β－ｇａｌ）基因的杆状病毒转移载体．ｐＡｃ３６０－β－ｇａｌ与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ经钙磷沉淀法共转染小菜蛾细胞系（ＢＣＩＲＬ－ＰＸ２－ＨＮＵ２,Ｐｘ）,利用Ｘ－ｇａｌ空斑检测分析,β－ｇａｌ基因成功地插入ＡｃＮＰＶ基因组中,得到重组病毒Ａｃ－β－ｇａｌ,重组病毒在Ｐｘ细胞中表达出受ＡｃＮＰＶ多角体蛋白基因启动子控制的具有生物活性的外源基因表达产物──β－ｇａｌ．     

棉铃虫(Heliothis armigera)的细胞培养

用Grace(1962)培养基,辅之以10—20%小牛血清,对棉铃虫蛹及成虫的生殖腺细胞,胚眙细胞,幼虫的血细胞,脂肪体及体壁细胞进行培养,并对其生长进行比较,发现在上述的培养中,以初羽化成虫的即巢细胞生长最好,维持的时间也最长,生长良好的卵巢细胞一般在12小时内即可贴附瓶壁,一周内可以长成单层。培养的细胞多兼有成纤维状或园形两种,亦有以上皮样细胞或园形细胞为主的。经过换液,有的培养中出现了成片较小的纺棰形细胞.抽样作分裂相的检查观察,证实了大量细胞处于分裂活动期。细胞在培养中有的存活超过了4个月,其中最长的已达19个月。原代培养的细胞能存活这样长的时间,实属罕见。唯未见这些细胞有什么变化,也看不到有增殖的迹象.全部培养都没有以昆虫血淋巴作培养基的辅助物.     

对虾白斑症病毒体内外感染的研究

WSSV可经注射、投喂或共居感染克氏螯虾和日本沼虾，病毒感染的组织匀浆物注射后发病很快，但蔗糖介质纯化的WSSV注射后发病较慢，Ficoll-400介质纯化的WSSV注射后发病时间介于前二者之间。中国对虾细胞内WSSV一般每个囊膜只含一个核衣壳，但此毒种经克氏螯虾反复增殖后，多粒包埋的病毒粒子明显增多。从病虾的每克鳃可提出约0．66mg的WSSV。含WSSV的血淋巴或组织匀浆液感染8种昆虫细胞后，传代2次仍未观察到病毒在其中复制。     

一种适合粉纹夜蛾5B1细胞生长的无血清培养基的研究

报道了一种适合粉纹夜蛾（5B1）细胞生长的无血清培养基（简称为SFM），该培养基以Tc-100基础培养基为基础，补加一定量的水解乳蛋白和酵母抽提物，并加入适量的微量元素，维生素，脂类复合物等，5B1细胞已在该SDFM中传代18代，研究结果表明：该培养基能支持5B1细胞的生长和芹菜夜蛾核型多角体病毒（SfaMNPV)在其中复制。     

草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞在生物反应器中培养条件初探

对草地贪夜蛾（ Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ） Ｓｆ ９ 细胞在２ Ｌ Ｂｉｏｓｔａｔ Ｒ Ｍ Ｄ 型搅拌式生物反应器中进行了培养,并对细胞的生长状况、葡萄糖的消耗等进行了测定;对重组病毒的增殖、外源基因的表达进行了初步探索．结果表明：细胞在该生物反应器中生长良好,细胞群体倍增时间３３．４ ｈ．病毒感染率大约在 ８９．８％ 以上,并在细胞中成功地表达了半乳糖苷酶基因     

1株脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其脂肪酶基因的克隆表达

从武汉市郊蓖麻地土壤中分离到1株产脂肪酶菌株,结合形态观察和生理生化鉴定,扩增16S rDNA并测序,运用Blast比对构建了进化树,发现该菌与粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的同源性高达99％,初步鉴定该菌属于沙雷氏菌属(Serratia),命名为Serratia sp.HS-L5.克隆了脂肪酶...     

D1蛋白酶的高效毛细管电泳检测

在低温条件下表达的两种融合蛋白pET-28a ctpA与pET-23a-ctpA通过亲和色谱纯化、层析柱脱盐及浓缩,获得大量较高纯度的可溶性融合蛋白;并用高效毛细管电泳(HPCE)技术对两种融合蛋白进行分离检测,同时用荧光法配合确证.高效毛细管电泳分离检测结果显示,运行缓冲液的pH值相同时,两种融合蛋白的迁移时间存在显著差异;运行缓冲液的pH值在一定范围内变化时,同种蛋白的迁移时间无显著变化,表明蛋白结构是影响蛋白迁移的主要因素,两种蛋白的结构存在差异.