广西巴马小型猪不同年龄生殖激素水平的分析

目的探讨广西巴马小型猪不同年龄生殖激素水平。方法利用ELISA酶免疫试剂盒和多功能标记免疫测定系统,对不同年龄的雌雄巴马小型猪血清生殖激素浓度进行测定。结果雄性巴马小型猪血清TESTO、FSH浓度从2月龄到6月龄呈上升趋势,在6月龄时达到最大值(分别为12.2 ng±8.9 ng/mL和64.6 ng±6.1 ng/mL),6月龄后浓度呈下降趋势;血清LH浓度从2月龄到4月龄呈上升趋势,在4月龄时达到最大值(46.8 ng±12.5 ng/mL),4月龄后呈下降趋势。雌性巴马小型猪从2月龄到4月龄,血清FSH、LH、E2浓度都呈现出显著升高趋势,到4月龄时达到最大值(分别为51.9 ng±54.0 ng/mL,23.2 ng±31.6 ng/mL,79.3 pg±93.0 pg/mL),4月龄后又都呈现较明显下降趋势。     

广西巴马小型猪雄性初情期和精液性状的分析

目的探讨广西巴马小型猪雄性初情期和精液品质性状。方法将15、20、25、26、27、28、29、30、45、55、62、75日龄巴马小型猪睾丸制作成切片,检查其曲细精管中是否已经产生精子;采集巴马小型猪精液,检测其物理性状和化学成分。结果初步判断雄性巴马小型猪的初情期为45日龄左右。巴马小型猪精液的主要物理性状:射精量107.5 mL±39.0 mL、酸碱度7.6±0.3、精子密度0.732亿/mL、精子活率0.754±0.079、精子活力0.376±0.168、精子畸形率0.256±0.159。主要化学成分:Na+1.56 mg±0.13 mg/mL、K+0.78 mg±0.06 mg/mL、Cl-1.62 mg±0.18 mg/mL、磷脂8.7 mg±0.2 mg/100 mL、果糖117.4 mg±81.0 mg/100 mL、柠檬酸45.6 mg±77.6 mg/100 mL。     

广西巴马小型猪生长期日粮蛋白与能量水平需要的测定

目的本试验对生长期(45~117日龄)的广西巴马小型猪进行了生长饲养实验。方法试验一:选择40头40日龄断奶广西巴马小型猪,按平均体重随机分为四组(10头/组)。在45~80日龄,四个组分别喂以含蛋白质水平为13%、14%、16%、18%的日粮;在81~117日龄,仍以上面的40头广西巴马小型猪为实验材料,分别喂以含蛋白质水平为11%、12%、13%、14%的日粮。试验二:选择40头40日龄断奶广西巴马小型猪,按平均体重随机分为四组(10头/组)。分别喂以日粮1(CP15%、DE12.95 MJ/kg),日粮2(CP15%、DE13.37 MJ/kg),日粮3(CP13%、DE12.95MJ/kg)和日粮4(CP13%、DE13.37MJ/kg)。结果在45~80日龄,上述不同蛋白质含量的日粮对广西巴马小型猪的总增重影响差异不显著(P>0.05);在81~117日龄,蛋白水平为12%、13%、14%的日粮对小型猪的总增重影响差异不显著(P>0.05),但蛋白质水平为11%的日粮组总增重显著低于前面三组(P<0.05)。试验二的结果表明,4种不同能量与蛋白组合的日粮对生长期(45~75日龄)小型猪的总增重影响差异不显著(P>0.05)。结论本实验结果表明广西巴马小型猪生长期(45~117日龄)日粮营养需要水平为粗蛋白12%~13%,消化能12.95 MJ/kg。日喂料量为体重的2.0%~2.25%即可维持广西巴马小型猪的生长期(45~117日龄)较缓慢的生长速度。     

广西巴马小型猪 ApoE 基因外显子 2 片段的多态性分析

摘要: 目的 克隆广西巴马小型猪载脂蛋白 E( ApoE) 基因外显子 2 片段并分析该片段的多态性,为建立广西巴马 小型猪动脉粥样硬化模型奠定基础。方法 以广西巴马小型猪基因组 DNA 为模板,PCＲ 扩增 ApoE 基因片段,应 用 PCＲ-SSCP 方法分析其多态性。结果 克隆获得长 237 bp 的 ApoE 基因外显子 2 片段,测序结果比对参考序列同 源性为 100% 。PCＲ-SSCP 分析发现在该片段的 229 位点存在多态性,表现为 AA 型、AT 型和 TT 型 3 种基因型。结 论 成功克隆广西巴马小型猪 ApoE 基因外显子 2 片段,该片段存在多态性,有 AA、AT 和 TT 3 种基因型,基因型频 率分别为 0. 302、0. 489 和 0. 209。     

广西巴马小型猪生长激素(pGH)基因全序列克隆及序列分析

目的克隆广西巴马小型猪生长激素(pGH)基因全序列,并与已发表的其它品种猪的生长激素(pGH)基因全序列进行比较,探讨该基因在广西巴马小型猪中可能存在的变异。方法以广西大学巴马小型猪基因组DNA为模板,扩增巴马小型猪生长激素基因的全序列,将该扩增片段亚克隆到pMD18-T载体后测序。再将测序结果在NCBI进行BLAST。结果测序结果证明克隆得到了巴马小型猪GH基因,全长为2 007 bp。同源性比较发现,巴马小型猪GH基因全序列与GenBank中发表的五指山猪、太湖猪及普通猪的GH基因全序列的同源性分别为99.4%、98.3%、93.9%。     

广西巴马小型猪活化素β_A/β_B基因cDNA克隆与序列分析

目的通过克隆广西巴马小型猪活化素(activin)βA/βB基因cDNA,分析其序列,为研究活化素的生物学功能打下基础。方法提取广西巴马小型猪发情母猪的卵巢总RNA,并以其为模板,以下游特异性引物为反转录引物,在AMV酶作用下合成cDNA;用LA-Taq进行PCR扩增出包括成熟肽在内的activinβA及βB基因的部分序列,把两个序列分别连接到PMD-18载体进行克隆和序列分析。结果包括成熟肽在内的activinβA及βB基因的部分序列长度分别为964 bp和791 bp,两个亚基的序列比较保守,与GenBank上发表的猪activin两个亚基同源性达到99.79%和99.62%。activinβA基因有两个碱基发生突变,其中一个在成熟肽序列上,一个在非编码序列上;βB基因信号肽序列上有三个碱基发生突变,其中一个是同义突变。     

广西巴马小型猪生长素(Ghrelin)cDNA的克隆及序列分析

目的扩增广西巴马小型猪生长素(Ghrelin)cDNA序列,分析其序列结构特点,为进一步从分子水平上对广西巴马小型猪的生长发育提供理论依据,也为日后构建原核表达载体、研究Ghrelin基因的生物功能奠定基础。方法以广西巴马小型猪胃底组织总RNA为模板,用特异性引物扩增Ghrelin的cDNA,纯化连接pMD18-T载体后转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆体,鉴定后测序。结果经测序证实克隆得到的广西巴马小型猪Ghrelin cDNA序列全长为357 bp,与相关文献报道一致。同源性比较发现,广西巴马小型猪Ghrelin cDNA基因序列与GenBank报道的猪相应序列同源性为99.7%,只有一处发生碱基突变。结论本实验成功克隆了广西巴马小型猪Ghrelin cDNA。     

广西巴马小型猪肌肉生长抑制素(Myostatin)cDNA克隆和序列分析

目的通过RT-PCR扩增广西巴马小型猪Myostatin cDNA序列,经过连接、转化、克隆测序后,与NCBI中发表的猪Myostatin序列进行同源性比较,分析广西巴马小型猪Myostatin的cDNA序列结构特点及与其他物种间的聚类关系,为日后构建Myostatin高效表达载体及进一步研究Myostatin对广西巴马小型猪肌肉生长的影响奠定基础。方法以广西巴马小型猪的肌肉组织总RNA为模板,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),利用合成的特异性引物,扩增得到巴马小型猪肌肉生长抑制素(Myostatin)cDNA的全序列。该扩增片段经纯化后,连接到pMD18-T载体上扩增,经一系列鉴定后,测序。结果本实验克隆到巴马小型猪Myostatin基因cDNA序列长度为1128 bp,与GenBank报道的猪Myostatin基因cDNA序列同源性高达99.7%,与人、奶牛、家鼠等物种的cDNA序列间同源性可达到92.3%以上,证明Myostatin基因具有较高的保守性。同时发现广西巴马小型Myostatin基因cDNA序列有三处存在碱基突变,两个为同义突变,一个为错义突变。     

广西巴马小型猪促生长激素释放激素成熟肽的克隆及序列分析

目的扩增广西巴马小型猪促生长激素释放激素(GHRH),分析其序列结构特点。方法以广西巴马小型猪基因组DNA为模板,用特异性引物扩增GHRH外显子3,再用引物延伸悬挂PCR法扩增GHRH成熟肽,纯化后,连接、转化到大肠杆菌,筛选阳性克隆,测序。结果经测序证实广西巴马小型猪GHRH外显子3及其成熟肽的基因序列与相关文献报道一致。克隆得到的广西巴马小型猪GHRH序列全长为132 bp,其中外显子3基因序列长105bp。同源性比较发现,广西巴马小型猪GHRH外显子3基因序列与GenBank(NCBI)中报到的猪GHRH外显子3相比,同源性为97.14%,有3处发生碱基变化。结论本实验成功克隆了广西巴马小型猪GHRH成熟肽序列。     

广西巴马小型猪的培育

目的以广西巴马香猪作为原始基础群,要培育出体型尽量小、两头乌毛色整齐、繁殖性能好、遗传性稳定、有关生物学特性明确、适于实验应用的小型猪品系。方法①纯繁闭锁繁育;②封闭群(A系)主要采用群内随机交配方式;③近交系(B系)是在第10世代封闭群的基础上开始选择近交家系,采用连续全同胞兄妹高度近交方式;④定向选择;⑤遗传监测;⑥饲养试验;⑦广西地方标准的制定;⑧有关生物学特性的研究;⑨实验应用。结果①1994年鉴定专家将培育的实验小型猪命名为"广西巴马小型猪",至今己有22年培育历史。②至2009年完成了广西巴马小型猪封闭群21世代的培育。③至2009年完成了广西巴马小型猪近交系11世代的培育。④对小体型、两头乌毛色的整齐性、多产性的选择及性格温顺的驯养均有效。⑤19个微卫星座位上平均观察等位基因数:17世代广西巴马小型猪封闭群为3.00个,在21个微卫星座位上近交系7世代平均观测等位基因数为1.9048个、平均有效等位基因数为1.5461个,平均基因纯合率为0.7232。⑥确认在广西巴马小型猪生长期间营养需要:蛋白质水平12%、能量3100kcal/kg、钙0.65%、有效磷0.32%。⑦在对质量控制因素研究的基础上制定出广西地方标准DB45/T546-2008《实验动物小型猪》(发布日期:2008.09.08、实施日期:2008.10.08)。⑧国内多家研究机构的应用表明广西巴马小型猪是应用于心血管病和糖尿病等研究的优秀模型动物。结论成功培育出适于医学、生物学实验应用的、具有独特优异特性的广西巴马小型猪封闭群和近交系。