满江红鱼腥藻glnA基因上游调控区的克隆及其序列分析

以满江红鱼腥藻（Ａａｃ）提取总ＤＮＡ为模板,通过ＰＣＲ技术,扩增得到其谷氨酰胺合成酶基因（ｇｌｎＡ）上游区．经酶切得到４０９ｂｐ的片段,并将其连接到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡｋｓ＋上测序．将测序结果与Ａｎａｂａｅｎａ７１２０调控序列比较,有９８２％的同源性．在上游调控中也具有ｎｉｆｌｉｋｅ和Ｅ．ｃｏｌｉｌｉｋｅ启动子,值得注意的是,调节蛋白ＶＦ１的结合位点正好位于ｎｉｆｌｉｋｅ启动子上．所克隆的片段不但对蓝藻固氮、泌氨的基因调控研究具有意义,也对表达载体的构建具有实用价值．     

玉米根细胞正面向外和内翻外质膜囊泡的分离

利用水双相分配分离法从玉米根细胞提取原生质膜囊泡。其质膜成分特异的K~+,Mg~(2+)—ATP酶活性比膜粗提液高1.67倍。其他细胞器标记酶活性在质膜组分中很低或没有。特异染色电镜形态学定量统计表明质膜组分中90％以上是质膜囊泡。去污剂刺激ATP酶活性实验证明,约92％囊泡是正面向外的。应用此法也证明NAD(P)H—氧化酶可能是跨膜存在的,其催化Fe~(3+)还原的位点可能在膜的内侧。应用高盐冻—融法并结合水双相分配分离法处理正面向外囊泡,可获得内翻外质膜囊泡,实验证明它不仅纯度高而且封闭。     

玉米根细胞质膜硝酸还原酶和铁氰化物还原酶活性的关系

以玉米离体根和根细胞质膜(PM)为材料，研究了加铁培养和铁胁迫条件下铁氰化物还原酶(FCR)和硝酸还原酶(NR)活性，以及两种活性河的关系．实验结果显示铁胁迫条件下FC．R活性随培养天效变化较加铁培养下有较快增加，一定时间后又下降．在加入K，Fe(CN)。后，铁胁迫的离体根NR活性的下降明显快于加铁培养的离体根．根细胞PM在加入K3Fe(cN)。后，NR活性与对照比降低了5倍，甚至为零；当从介质中除去Fe抖后，NR活性成倍恢复．上述结果表明在铁胁迫条件下铁氰化物的还原与硝酸根的还原间存在着强烈的电子竞争．     

小麦高亲和力NO3-转运体基因相关序列的克隆与表达分析

根据已知高亲和力ＮＯ３＾－转运体基因－大麦ＢＣＨ１和衣藻ＮＲＴ２；１Ｃｒ两者之间的保守多肽序列，设计一对简并引物，通过ＲＴ－ＰＣＲ，从小麦根总ＲＮＡ中，获得高亲和力ＮＯ３＾－转运体基因ｃＤＮＡ片段ＴａＮＲＴ１（６５７ｂｐ）。ＴａＮＲＴ１与已知８种高等植物的高亲和力ＮＯ３－转运体基因具有很高的同源性。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ显示该基因讯速表达，４ｈ左右最强，２４ｈ左右恢复至诱导前水平。     

NPTⅡ基因在满江红鱼腥藻染色体DNAglnA位点的定点整合及对泌氨和细胞形态结构的影响

本研究构建了含glnA基因片段和TPTⅡ基因的单交换整合型重组质粒pGN1-4,并通过电激法,三亲接合转移和二亲接合转移法号入到满江红鱼腥藻细胞中。用蓝细菌原位杂交法筛选出转化细胞菌落。再经Southern杂交方法进一步证实了转化结果。化学测氨法表明,培养后7～14d泌氨达到高峰,转化细胞泌氨比对照高40％。光镜观察表明,转化细胞藻丝变短,易断成单个细胞,异形胞频率降低;扫描电镜观察指出,转化细胞外壁有鳞片状鞘层,而对照较光滑。     

氧对玉米根细胞质膜氧化还原活性及吡啶核苷酸含量的影响

玉米(Zea mays)根尖的氧化还原活性随介质环境氧的浓度增高而升高,当氧分压达17.262 kPa时,氧化还原活性趋于平稳。有氧与缺氧的根尖各种辅酶的含量有显著差异,其中NADPH和NAPP~+的含量与氧化还原活性的变化呈正相关,但与NADH和NAD~+的含量关系不大。缺氧根再供氧,其NADPH和NADP~+含量随加氧的时间而升高,而NADH和NAD~+的含量则相应减少。供氧根比缺氧根NAD激酶活性提高约20％,表明NAD激酶在有氧条件下与辅酶Ⅰ转换为辅酶Ⅱ有关。     

2,4-D对玉米根氧化还原活性的影响及其与根生长和酶活性等的关系

将５ｍｍ长的玉米根尖与不同浓度的２,４二氯苯氧乙酸（２,４Ｄ）一起保温,在１０－１５ｍｏｌ／Ｌ至１０－９ｍｏｌ／Ｌ浓度范围内,根尖对铁氰化钾的还原活性随２,４Ｄ浓度升高而增加;当２,４Ｄ浓度超过１０－８ｍｏｌ／Ｌ时,还原活性受到抑制．根尖的生长与铁氰化钾还原速率具有很好的相关性,葡萄糖６磷酸（Ｇ６Ｐ）脱氢酶活性与铁氰化钾的还原和细胞内ＮＡＤＰＨ２水平相平行,ＡＴＰ酶活性也与上述变化相一致．在低浓度的２,４Ｄ处理下,介质ｐＨ下降,高浓度的２,４Ｄ则使介质碱化．上述结果表明２,４Ｄ对玉米根氧化还原活性和生长速率有显著影响,它的作用是通过活化质子分泌和它对代谢途径的调节实现的．     

缺铁诱导玉米根cDNA文库的构建及铁胁迫基因(fdr3)的筛选和鉴定

为了分离铁缺乏相关基因,构建了一个滴度为４．５ｘ１０~５ｐｆｕ／μｇ的λＺＡＰ表达型缺铁胁迫玉米根 ｃＤＮＡ文库．通过差异筛选得到 ６个阳性克隆．经 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ验证在缺铁条件下加强表达的有ｆｄｒ３（Ｆｅ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ－ｒｅｌａｔｅｄ） ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｅ。