水稻中一种RNA结合蛋白cDNA的筛选和结构分析

植物叶绿体基因组全结构的阐明,已充分揭示该遗传体系兼有原核生物和真核生物基因组的特征。在叶绿体基因中,除存在一些内含子结构外,还具有像rpl12这样复杂的分割式基因。同时,不同基因的转录速度也存在着显著的差异。这些都意味着叶绿体基因在转录后必然有着复杂的剪接加工过程。RNA结合蛋白是一类在RNA加工中起重要作用的蛋白。Li等首次从烟草叶绿体中分离到与RNA转录直接相关的RNA结合蛋白,并且证明它们是由细胞核编码,在细胞质中合成后再输入到叶绿体中去的。至今,已从烟草、菠菜以及拟南芥菜等植物中发现了约10种核编码的叶绿体RNA结合蛋白,它们有类似的构造特征。我们从水稻cDNA文库中首次筛选到一个RNA结合蛋白(cp28)的基因,其相应的肽链由264个氨基酸组成。和其他叶绿体RNA结合蛋白相仿,它也包含有两个RNA结合结构域(称为consensus sequence-type RNA-binding domain,即CS-RBD),其中各含有一个由8个氨基酸组成的高度保守的一致顺序(ribonucleoprotein consensus sequence,即RNP-CS)。N端区域的传送肽(穿膜信号肽)由60个氨基酸组成,其后是一段负电荷十分集中的酸性肽段,但传送肽和酸性肽段的氨基酸顺序与其他植物的RNA结合蛋白的同源性很低。根据全长肽链的同源性比较,我们还分析了水稻cp28     

重组大豆KUNITZ型胰蛋白酶抑制剂Tid的大肠杆菌表达及抑制活性研究

利用大肠杆菌高效表达系统表达大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(SBTi—A2)Ti^d,并利用亲和层析的方法纯化得到有抑制胰蛋白酶活性的SBTi^d．对重组SBTi^d的pH稳定性和温度稳定性与天然SBTi^d进行了比较研究.结果表明重组SBTi^d在高pH下具有更好的稳定性,预示了SBTi^d作为生物农药或利用转基因方法提高作物抗虫性的应用前景．     

水稻蛋白质激酶CK2催化亚基的表达和活性测定

用RT-PCR的方法分离到了水稻蛋白质激酶CK2催化亚基（OsCK2α）的cDNA,通过大肠杆菌高效表达系统表达了OsCK2α,并利用亲合层析的方法纯化了重组蛋白质GST—OsCK2α．得到的大肠杆菌重组蛋白质GST—OsCK2α能够体外磷酸化CK2的常用底物酪蛋白,并且该磷酸化反应能够被CK2的特异性抑制剂肝素所抑制,研究表明重组CK2α具有典型的蛋白质激酶CK2的活性,为研究水稻CK2及其底物的功能奠定了基础．     

与小麦高分子量谷蛋白基因探针杂交的阳性克隆分离及基因在重组子上的定位

将经San 3A部分酶切后的小麦总DNA片段克隆到λCharon40载体上构建了小麦基因文库.以两个人工合成的同源于小麦高分子量(HMW)谷蛋白基因的片段对此基因库进行筛选,获得了两个阳性克隆,推测其中一个包含了HMW谷蛋白全部的基因顺序.两个克隆的部分限制性内切酶位点已被确定.在Southern杂交中,用位于基因编码区内的寡核苷酸片段作探针,将阳性部分定位在一定的酶切片段上.     

大豆KUNITZ型胰蛋白酶抑制剂的稳定性及抗虫性研究

大豆kunitz型胰蛋白酶抑制剂（SBTi-A2)存在于种子中，2种kunitz型胰蛋白酶抑制剂Ti^a和T^1d得到纯化，并对它们的pH稳定性和温度稳定性进行了比较研究，而且通过人工饮料喂养鳞翅目昆虫棉铃虫来研究SBTi-A2的抗虫性，结果显示，棉铃虫的幼虫喂食含有Ti^a的人工饲料后，表现出生长延缓、体重减轻、羽化率降低、死亡率增加，由此显示了SBTi-A2作为生物农药及利用转基因方法使作用提高抗虫性的应用前景。