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人肿瘤坏死因子Gln102—Glu107缺失型的构建… 总被引:1,自引:0,他引:1
基于对有关肿瘤坏死因子结构和功能关系研究资料的分析,设计了一种缺失了Gln 102-Glu107位共6个氨基酸的新型肿瘤坏死因子,首先,利用PCR技术分析扩增出Vall-Gys101和Gly108-Leu157基因片段,连接后再克隆到表达载体pJLA503中,转化大肠杆菌,发酵时进行42℃诱导表达,得到了新型肿瘤坏死因子CG-hTNF的产物。经过对pCG-hTNF中克隆的基因进行DNA测序鉴定,证 相似文献
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淋巴毒素(Lymphotoxin,LT)是由活化的T淋巴细胞分泌的一种糖蛋白,凝胶迟滞电泳分析发现,TNF-α诱导30min的Jurkat细胞核抽提物与LT基因5'上游片段可形成多种DNA-蛋白质复合物.DNaseⅠ足迹法实验发现,LT基因5'端上游-106~-83bP(共24bP)序列具有蛋口保护足迹:此24bp的序列中存在一个kB样结合位点:-100~-90bP(5'-GGGGGCTTCCC-3').以此蛋白保护足迹区序列而设计合成的寡核苷酸探针进行的凝胶迟滞电泳分析及竞争反应表明,NF-kB类蛋白因子参与了此序列的DNA-蛋白质的特异性结合,提示TNF-α可能通过激活NF-kB类蛋白质因子参与LT基因的表达调控. 相似文献
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带有单纯疱疹病毒脱氧胸苷激酶基因(HSV-tk)的腺病毒结合ganciclovir(GCV)对分裂细胞有很强的杀伤作用.在感染复数(M.O.I,MultiPlicityofInfection)达到1000时对人体肺腺癌细胞A549的杀伤几乎达到100%.四种人体肺癌细胞株(A549,LAX,SPC,SKY)对带HSV-tk的腺病毒(ADV/RSV-tk)的杀伤作用表现出不同的敏感性.另Acyclovir(ACV)和GCV对感染了重组腺病毒ADV/RSV-tk的细胞都有一定杀伤作用,但杀伤效果有很大差别;就A549而言,GCV的杀伤作用比ACV高7~8倍.此外ADV/RSV-tk结合GCV杀伤肿瘤细胞时有“旁观者效应”,即感染了ADV/RSV-tk的细胞与未感染细胞混合后,后者也明显地遭到杀伤. 相似文献
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淋巴毒素(LT)是由活化的T淋巴细胞分泌的一种糖蛋白,凝胶迟滞电泳分析发现,TNF-α诱导30min的Jurkat细胞核抽提物下LT基因5'上游片段可形成多种DNA-蛋白质复合物。DNaseⅠ足迹法实验发现,LT基因5'端上游-106 ̄-83bp(共24bp)序列具有蛋白保护足迹;此24bp的序列中存在一个kB样结合位点:-100 ̄-90bp(5'-GGGGGCTTCCC-3')。以此蛋白保护足迹 相似文献
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腺病毒同源重组子的鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
携带入IFN-γcDNA序列的E1区缺失的腺病毒载体pAdl2/RSV-IFN-bpA与pJM17质粒,通过磷酸钙沉淀法共转染293细胞,经同源重组,共获得6个病毒噬斑。病毒噬斑感染293细胞,至出现完全细胞病变效应(CPE)后,抽提细胞内的病毒DNA,经XhoⅠ酶切后走凝胶电泳,出现重组腺病毒圾的3.5kb大小的DNA条带,^32P标记的探针pAdl2/RSV-IFN-bpA与XhoⅠ酶切过的病 相似文献
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干细胞生长因子能够刺激激造血干细胞生长,并与多种细胞因子有协同作用。研究中,运用PCR手段,从中国人胎肝mRNA中扩增得到编码人SCF全部胞外部分的cDNA。经测序鉴定后,将其克隆人表达载体pRSET-C,并在大肠杆菌DE3菌株进行表达。 相似文献
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