不同类型核受体对小鼠体细胞重构胚胎发育能力的影响

为探讨昆明白小鼠不同类型的卵胞质对小鼠体细胞核移植胚胎发育的影响, 采用C57BL/6小鼠耳成纤维细胞为核供体, 昆明白小鼠卵母细胞为核受体进行单次核移植, 同时采用将重构胚类合子核移入去核合子、重构胚2-细胞卵裂球细胞核移入去核MⅡ期卵的方法进行连续核移植, 通过将重构胚2-细胞卵裂球与正常昆明白小鼠2-细胞胚胎卵裂球交换融合得到四倍体胚胎. 对所得胚胎进行体外培养, 结果发现, 以去核的昆明白小鼠MⅡ期卵母细胞为核受体进行单次核移植所得到的重构胚胎发育率很低, 且只能发育到8-细胞阶段. 两种连续核移植重构胚发育率均有所提高, 但仅重构胚类合子核移入去核合子时有囊胚出现, 囊胚发育率为1.9%. 重构四倍体胚胎囊胚发育率却很高(62.3%), 染色体分析表明其中51.5%为真正的四倍体. 结果表明, 昆明白小鼠不同类型核受体对重构胚胎的发育能力有显著影响, 其去核卵母细胞胞质对体细胞核重编程的能力较弱, 而当其与正常受精卵胞质共同作用时可较好地对体细胞核重编程.     

克隆牛过程中电融合条件对附植前胚胎发育的影响

实验比较了克隆牛过程中电融合条件的改善对附植前胚胎发育的影响. 电融合强度为140 V/mm,10 μs/次时的效率要较100 V/mm,20 μs/次和180 V/mm,10 μs/次时高,可以降低融合后重构胚死亡率,提高克隆牛囊胚发育率. 施加直流电脉冲前先给予5 V交流电场预处理数秒钟,然后在电极之间通以两个直流脉冲(140 V/mm, 10 μs/次,间隔0.1 s)与不用交流电预处理对融合率和重构胚的发育率无显著差异. 另外实验比较了甘露醇和山梨醇两种融合液对融合及重构胚发育的影响,结果表明囊胚发育率差异不显著,但山梨醇较甘露醇融合液更容易操作. 实验生出的4头克隆牛存活至今.     

牛卵母细胞不同时间的成熟培养可提高核移植效率

：比较了成熟培养不同时间的卵母细胞的成熟率、去核率及用于核移植的效率,认为成熟培养21 h的卵母细胞虽然有较高的成熟率,但不适于采用盲去法去核.成熟培养19 h的卵母细胞核移植效率略高于成熟培养17 h.因此认为采用盲去法去核操作大批卵母细胞时,19 h的体外成熟培养时间是比较适宜的.