虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ天然突变体的分离纯化与鉴定

通过离子交换及反相HPLC，从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离得到一种虎纹毒素-Ⅰ天然突变体，MALDI-TOF质谱仪分析表明该多肽天然突变体分子量为3636 Da．Edman测序结合串联质谱和氨基酸组成分析鉴定出该天然突变体的序列为H2N-ACKGV FDACT PGKNE CCPNR VCSDK HKWCK WQ-COOH，其中6个Cys形成3对二硫键，小鼠脑室注射实验表明，该天然突变体能使小鼠致死，但不能阻断小鼠膈神经-膈肌标本的神经肌肉接头传递，本研究结果表明，K32残基对于HWTX-Ⅰ的生物学活性有关键性作用。     

虎纹捕鸟蛛毒素HWTX -Ⅰ和芋螺毒素MVIIA嵌合体的固相化学合成

采用Fmoc固相合成的方法,将来自芋螺的ω-芋螺毒素(ω-Conotoxin) MVIIA (N-型钙离子通道阻断剂)中已知活性位点及可能的相关序列嵌入虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ(HWTX -Ⅰ) 的非活性位点区,代替其相应序列,构建同时携带两种活性位点的多肽嵌合体.嵌合体用 MALDI-TOF质谱鉴定.通过RP-HPLC检测其氧化复性过程,摸索出嵌合体的最佳复性条件.经过两次RP-HPLC脱盐纯化.结果表明,设计合成的嵌合体在1×10-5g/mL,利用小鼠隔神经-隔肌标本的阻断实验证明嵌合体显示了27 %的天然HWTX-Ⅰ的神经毒活性.实验结果表明,HWTX -Ⅰ具有蛋白质工程改造前景.     

肝质膜蛋白质组研究中染色方法比较及优化

对肝脏质膜蛋白质组进行了5种染色方法比较实验,发现荧光染的质谱鉴定准确性高于快速银染(Blum银染),快速银染又高于普通银染(Plus OneTM).考染中G-250的效果比R-350好,且背景低、快速.对考染后切取了高丰度蛋白质点后的胶块再进行快速银染,可以既提高鉴定的准确性也不丢失低丰度蛋白质.     

乙醇系统反相高效液相色谱分析DBAS—氨基酸

采用对二甲氨基偶氮苯磺酰氯衍生法分析氨基酸组成，利用醋酸盐／乙醇系统对衍生的氨基酸进行ＨＰＬＣ分离，用乙醇取代乙腈作为志析剂可减少毒性，降低成本，与常用的异硫氰酸苯酯衍生法相比，实验证明ＤＡＢＳ－Ｃｌ衍生法具有高灵敏度，高稳定性和操作简便的优点。     

虎纹捕鸟蛛雌蛛粗毒的毛细管区带电泳分离分析

采用毛细管区带电泳（ＣａｐｉｌａｒｙＺｏｎｅＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ,简称ＣＺＥ）模式,以虎纹捕鸟蛛（Ｓｅｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎａ）雌蛛粗毒为样品进行电泳分离分析．对电泳缓冲溶液的ｐＨ、浓度以及有机试剂和两性离子添加剂的加入对粗毒分离的影响作了研究．结果表明,粗毒在ｐＨ１１．５,７５ｍｍｏｌ／Ｌ的磷酸盐缓冲液中可以得到最佳的分离．两性离子添加剂（三甲基氨基丙磺酸）能明显改善分离效果;并在实验中确定了虎纹毒素－Ｉ（Ｈｕｗｅｎｔｏｘｉｎ－Ｉ,简称ＨＷＴＸ－Ｉ）和虎纹凝集素－Ｉ（Ｓｅ－ｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎａｌｅｃｔｉｎ－ｌｉｋｅｐｅｐｔｉｄｅ－Ｉ,简称ＳＨＬＰ－Ｉ）在粗毒电泳图谱中的位置．     

脯氨酸乙内酰硫脲(TH-Pro)的一种制备新方法

采用Ｌ－脯氨酸（Ｌ－Ｐｒｏ）为原料,硫氰酸铵（ＮＨ４ＳＣＮ）为偶联试剂,制德脯氨酸乙内酰充脲（ＴＨ－Ｐｒｏ）。产物经过反相ＨＰＬＣ纯化,并通过紫外光谱扫描,质谱和核磁共振等方法鉴定,证明成功制备了脯氨酸乙内酰硫脲,并对其反应进行了阐述,经过对反应条件的优化,使产率达到了８４％。     

亚非马蜂（Polistes olivaceus）粗毒的生物学活性

本文报道一种新的蜂毒采集方法，测定了亚非马蜂（Ｐｏｌｉｓｔｅｓ　ｏｌｉｖａｃｅｕｓ）粗毒的部分物理性状和生物学活性．该粗毒含有透明质酸酶、胆碱酯酶、蛋白水解酶、ＤＮＡ酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶，并具有很强的溶血活性（其半溶血量ＨＵ_（５０）＝１７μｇ／ｍｌ），但肝素对其溶血作用有一定的抑制作用．其对小鼠ＬＤ_（５０）为５．５４ｍｇ／ｋｇ，对美洲蜚蠊ＬＤ_（５０）为７．４５μｇ／ｇ．药理学实验表明该粗毒对小鼠的膈神经－膈肌接头的神经冲动的传递以及膈肌的收缩都有不可逆的阻断作用．该粗毒能明显抑制蟾蜍离体心肌的收缩，但其抑制作用可被阿托品所解除。     

利用飞行时间质谱进行蛋白质和多肽C端序列测定

用羧肽酶Y水解蛋白质和多肽，结合飞行时间质谱（MALDI－TOF－MS）测定酶解后缩短肽的质量，根据相邻两肽峰的质量差别读出蛋白质和多肽的C端序列，在pmol水平下测定了人促肾上腺皮质激素片段以及人血管紧张肽片段，其中人促上腺皮质激素片段测到了C端15个氨基酸残基的顺序。     

ω-芋螺毒素 MVIIA/虎纹捕鸟蛛毒素-I嵌合体HM-1227的合成及活性测定

用Fmoc固相多肽合成的方法手工合成了一种ω-芋螺毒素MVIIA和纹捕鸟蛛毒素-I的嵌合体HM-1227，经过RP-HPLC纯化和氧化复性，小鼠隔神经-隔肌标本的阻断实验显示此嵌合体能实现二硫键完全配对与稳定折叠并具有弱的神经毒活性。实验结果表明，ω-CtxMVIIA和HWTX-I的分子框架稳定，部分序列交换后仍能实现二硫键配对与折叠，说明该结构模体可以作为蛋白质工程的分子框架。     

三丁基硅异硫氰酸酯作偶联试剂进行蛋白质和多肽C端序列分析

报道一种新的用于化学降解法蛋白质C-端序列分析的偶联试剂三丁基硅异硫氰酸酯（tributylsilylisothiocyanate,TBus-ITC),用氯化三丁基硅和硫氰酸钾反应生成三丁基硅异硫氰酸酯,然后以乙酸酐作活化试剂,TBuS-ITC乙腈溶液作偶联试剂,以合成的10肽为模型肽,在低纳摩尔的水平上测到了该肽的C端4个氨基酸,其初始产率为53.1%,重复产率为57.6%。