体外APC/C活性体系的建立及其影响因素的研究

为获得具有细胞周期后期促进复合物(APC/C)活性的细胞裂解液并建立APC/C体外活性检测体系,以其底物Cyc-lin B及Securin的降解为检测指标,分别从细胞阻滞于有丝分裂期的时间,UBCH10(APC/C的E2酶)的浓度以及裂解液浓度等几个方面研究了各种处理因素对APC/C活性的影响,并且用体外翻译底物验证了其活性及相关结论。此项工作为进一步探索APC/C相关分子事件奠定了基础。     

表皮生长因子效应评价细胞模型的建立

为了筛选表皮生长因子(EGF)信号通路的未知调控分子,利用人正常乳腺上皮细胞系MCF10A建立了EGF效应评价模型,包括细胞增殖、迁移以及细胞周期的进程等。结果显示,EGF能有效促进MCF10A细胞的增殖。饥饿同步化后,EGF能促进细胞从G1期进入S期,开始DNA的合成。此外,Transwell实验显示EGF能明显促进MCF10A细胞的迁移。     

体外反应体系中APC/C活性及相关研究

为获得具有细胞周期后期促进复合物（APC/C）活性的细胞裂解液并建立APC/C体外活性检测体系,以其底物Cyclin B及Securin的降解为检测指标,分别从细胞阻滞于有丝分裂期的时间, UBCH10（APC/C的E2酶）的浓度以及裂解液浓度等几个方面研究了各种处理因素对APC/C活性的影响,并且用体外翻译底物验证了其活性及相关结论。此项工作为进一步探索APC/C相关分子事件奠定了基础。     

高内涵筛选NF-kB信号通路的技术体系建立

NF-KB是参与免疫调节、炎症反应、肿瘤发生等过程重要的转录因子,在TNFa、IL-1β、LPS等因子诱导下NF-KB发生核转位并渺活其转录活性.尝试利用高内涵筛选(High Content Screerung,HCS)和RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术建立NF-KB核转位高通量筛选体系,该体系的应用将有助于发现新的NF-KB信号通路调节因子,为免疫与肿瘤的机制研究提供线索.     

用体外转录法制备小干扰RNA抑制Hela细胞CUEDC2基因表达

CUEDC2是一个广泛表达于各种真核生物、功能尚不明确的基因.利用一种改进的体外转录方法获得包含CUEDC2基因靶序列的长链RNA,进而通过RNA酶H切割引导序列形成成熟siRNA.转染Hela细胞并进行免疫印迹检测.结果显示,运用此方法得到的siRNA能够有效地抑制细胞中内源CUEDC2的表达,此项方法为CUEDC2的深入功能分析奠定了基础.