补阳还五汤与高血压病气虚血瘀证“方证相关”的蛋白质组学研究

揭示补阳还五汤与高血压病气虚血瘀证"方证相关"的现代生物学基础,制作高血压病气虚血瘀证细胞模型。用补阳还五汤含药血清干预细胞模型,利用双向凝胶电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)技术筛选及鉴定差异表达的蛋白点。并对其进行生物学分析。结果高血压病气虚血瘀证组与健康对照组比较,差异蛋白质点有30个。其中,有16个蛋白上调,14个蛋白质下调。补阳还五汤组与高血压病气虚血瘀证组比较,差异蛋白质点有14个。其中,有9个蛋白上调,5个蛋白质下调。MALDI-TOF-MS/MS鉴定出:高血压病气虚血瘀证组与健康对照组差异蛋白点共有8个蛋白被成功鉴定出来。表达上调的蛋白有肽基脯氨酰异构酶A、肽基脯氨酸顺反异构酶A样1亚型、真核翻译起始因子5A-1 B亚型、微管蛋白beta-2C、CRA_b亚型、3-羟酰辅酶A脱氢酶2型异构体2。表达下调的蛋白有丙酮酸激酶同工酶M1亚型、抑制蛋白-1、抑制蛋白-1 1亚型、补阳还五汤组与高血压病气虚血瘀证组差异蛋白点共有3个蛋白被成功鉴定出来。表达上调的蛋白有丙酮酸激酶CRA_c亚型、热休克蛋白27;表达下调的蛋白有膜联蛋白A1,CRA_b亚型。这些蛋白多与促进或抑制细胞凋亡有关。说明高血压病气虚血瘀证存在着细胞凋亡,补阳还五汤可以纠正高血压病气虚血瘀证引起的细胞凋亡。这些差异蛋白可以作为高血压病气虚血瘀证的标志蛋白或补阳还五汤的作用靶点,抑制细胞凋亡可能是补阳还五汤与高血压病气虚血瘀证"方证相关"的现代生物学基础之一。     

高血压病气虚血瘀证患者血清对CRL-1730凋亡相关基因、miRNA表达的影响及补阳还五汤的干预作用

为探讨高血压病气虚血瘀证患者血清对人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730)凋亡的影响与其作用机制。应用实时定量PCR(polymerase chain reaction)芯片技术检测与miRNA芯片技术分别检测与人细胞凋亡相关的89个关键基因和384个miRNAs的表达。高血压病气虚血瘀证组与非气虚血瘀证组比较,有1个上调及3个下调miRNA,与健康对照组比较,89个基因有22个上调基因和1个下调基因,有8个上调及2个下调miRNA,有统计学差异(P0.05);高血压病非气虚血瘀证组与健康对照组比较,89个基因有19个上调基因和1个下调基因,有12个上调及2个下调miRNA,有统计学差异(P0.05)。补阳还五汤高剂量组与高血压病气虚血瘀证组比较,89个基因中有5个上调基因和1个下调基因,有6个上调miRNA,有统计学差异(P0.05);中剂量组与高血压病气虚血瘀证组比较,89个基因有7个上调基因和3个下调基因,有3个下调miRNA,有统计学差异(P0.05);低剂量组与高血压病气虚血瘀证组比较,89个基因中有5个上调基因和3个下调基因,有3个上调及1个下调miRNA,有统计学差异(P0.05)。高血压病气虚血瘀证患者血清诱导内皮细胞凋亡的机制可能与凋亡相关的mRNA和miRNA表达失调有关,其中,TNFSF10具有关键作用,补阳还五汤对上述部分差异表达的凋亡相关分子表达具有调节作用。     

芒果苷对自发性高血压大鼠心脑肾组织形态学的影响

观察芒果苷对自发性高血压模型大鼠心、脑、肾等组织形态学特别是炎症损伤的影响,以自发性高血压大鼠(SHR)为研究对象,随机分为模型组、芒果苷高剂量组、芒果苷中剂量组、芒果苷低剂量组和苯那普利组,再以同龄的WKY大鼠作为正常对照。利用光镜、透射电镜观察各组大鼠的心、脑、肾等组织的形态结构。光镜结果显示:脑组织形态学未见明显改变,芒果苷高、中、低剂量组可以改善心肌炎细胞浸润及肾小球萎缩,坏死等。电镜结果显示:芒果苷可以抑制心肌细胞凋亡,改善肌原纤维排列,消除线粒体肿胀,降低系膜细胞及基底膜厚度。说明芒果苷对自发性高血压大鼠心、肾组织形态学具有改善作用,包括对炎症损伤的保护。     

芒果苷联合葛根素对自发性高血压大鼠肾脏炎性损伤的协同保护作用

以自发性高血压大鼠作为实验动物模型,观察芒果苷联合葛根素对SHR形态学及炎症因子IL-6,IL-10,TNF-α表达的影响,探讨芒果苷联合葛根素是否能增强保护肾脏炎症损伤的作用。将8只WKY大鼠作为对照组A,再将72只SHR大鼠随机分为模型组B、苯那普利组C(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))、芒果苷组D(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))、葛根素组E(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))、芒果苷(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))+葛根素片(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))组F、芒果苷(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))+葛根素片(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))组G、芒果苷(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))+葛根素片(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))组H、葛根素片(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))+芒果苷(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))组I、葛根素片(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))+芒果苷(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))组J。每天给药10 m L/kg连续灌胃,灌胃给药2个月后停药,杀鼠前禁食12 h。用显微镜观察大鼠肾组织病理形态结构,免疫组化法检测大鼠肾组织IL-6、IL-10、TNF-α的表达,ELISA法检测SHR IL-6、IL-10、TNF-a水平。各组大鼠肾脏组织均未见明显病理形态学改变;免疫组化检测和酶联免疫检测结果显示:与模型组比较,各组大鼠肾组织IL-6,IL-10,TNF-α含量均有不同程度下降。芒果苷联合葛根素对自发性高血压大鼠肾脏组织形态学无显著影响;可下调大鼠肾脏组织异常升高的IL-6,IL-10,TN-α水平。     

高血压病气虚血瘀证患者血清对CRL-1730分泌凋亡相关蛋白的影响

探讨高血压病气虚血瘀证患者血清诱导人脐静脉内皮细胞株CRL-1730凋亡的机制,为高血压病气虚血瘀证的实质研究提供实验依据。以高血压病气虚血瘀证患者血清作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞株,用酶联免疫法(ELISA)检测细胞培养上清液凋亡相关蛋白Caspase-3、P53、Fas、Fas L、Bax、Bcl-2含量,并观察补阳还五汤含药血清的干预作用。与健康组相比,高血压病气虚血瘀证组、高血压病非气虚血瘀证组细胞上清液中的Caspase-3、P53、Fas、Fas L、Bax表达量升高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。高血压病气虚血瘀证组、高血压病非气虚血瘀证组细胞上清液中的Bcl-2表达量降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。与高血压病非气虚血瘀证组相比,高血压病气虚血瘀证组Caspase-3、P53表达量升高,差异有统计学意义(P0.01)。另外,与高血压病气虚血瘀证组相比,补阳还五汤高、中、低剂量组细胞上清液中的Caspase-3、P53、Fas、Fas L、Bax表达量降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),Bcl-2表达量升高,差异有统计学意义(P0.05)。高血压病气虚血瘀证(QDBS)患者血清诱导内皮细胞凋亡的机制可能与调节Caspase-3、P53、Fas、Fas L、Bax、Bcl-2的表达量有关,补阳还五汤(BYHWD)对内皮细胞凋亡有一定的保护作用。     

黄芩、苍术对湿阻中焦证大鼠燥湿作用的性效关系

为了观察黄芩和苍术对湿阻中焦证证候模型燥湿功效的差异,阐明黄芩和苍术燥湿作 用与药性组合的关联性,将64只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、黄芩高剂量组、黄芩中剂量 组、黄芩低剂量组、苍术高剂量组、苍术中剂量组和苍术低剂量组。正常组常规喂养,其余各组通 过饱时内服油脂、饥时灌胃冰水和外部寒湿环境作用20 d复制湿阻中焦证模型。采用苏木素-伊 红（HE）染色观察大鼠胃和结肠组织的病理学变化,采用胃液游离酸度测定方法检测胃液酸度,采 用胃蛋白酶活性测定方法测定胃蛋白酶活力,使用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠结肠组 织水通道蛋白3（AQP3）表达情况。结果表明,与正常组比较,模型组大鼠宏观表征显示具有湿阻 中焦证的表现,胃、结肠组织有炎症反应,胃液游离酸度降低（P<0.05）,胃蛋白酶活力减弱（P< 0.05）;结肠组织中AQP3蛋白表达量有所下降。与模型组比较,给药组大鼠宏观表征得到改善,黄 芩和苍术对模型大鼠胃和结肠组织炎症都有一定的改善作用,苍术各剂量组均可升高模型大鼠胃 液游离酸度（P<0.05）和增强模型大鼠胃蛋白酶活力（P<0.05）,黄芩各剂量组也可升高模型大鼠胃 液游离酸度和增强模型大鼠胃蛋白酶活力,但差异无统计学意义,黄芩中、低剂量组和苍术高、中、 低剂量组均能显著降低结肠组织AQP3蛋白表达,研究证明黄芩和苍术对湿阻中焦证大鼠的燥湿 作用与其药性组合具有一定的关联性,即其燥湿功效的强弱与其寒热药性有关,苦温的苍术比苦 寒的黄芩作用效果更好。