柔嫩艾美耳球虫保守蛋白基因EtCHP40的分子特性研究

鸡球虫病是由几种艾美耳球虫寄生鸡肠道引起的一种危害严重的寄生虫病.目前,球虫病的防治主要依赖于药物,但由于药物长期广泛使用使鸡球虫对药物产生了严重的耐药性.为研究鸡球虫耐药性产生的分子机制,本实验室前期利用RNA-sequence对柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株与敏感株进行了转录组分析,获得敏感株与耐药株的差异表达基因,发现柔嫩艾美耳球虫保守蛋白40(EtCHP40)在马杜拉霉素耐药株表达显著上调.本研究以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA第一链为模板,成功克隆了柔嫩艾美耳球虫保守蛋白40(EtCHP40)基因,并在原核表达系统中成功表达了重组蛋白(rEtCHP40).利用实时荧光定量PCR分析了该基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段以及不同虫株(耐药株和敏感株)的mRNA转录水平.结果显示EtCHP40基因在第二代裂殖子的mRNA转录水平最高;与敏感株相比,EtCHP40基因的mRNA转录水平在耐药株上调,且在马杜拉霉素耐药株的转录水平显著高于其他耐药株,另外发现在不同浓度的盐霉素作用下,随着药物浓度的升高,EtCHP40的mRNA转录水平也升高.间接免疫荧光定位结果表明该蛋白主要分布在子孢子的表面和顶端.因此,推测该蛋白可能参与了虫体在宿主细胞内的生长发育和对药物产生耐药性的过程.     

用于盐酸阿霉素增敏的双给药水凝胶体系制备

多药耐药型乳腺癌细胞对抗癌药物盐酸阿霉素(DOX·HCl)敏感性下降,需要设计和制备一种实现抗癌药物增敏的给药体系.提出一种同时负载DOX·HCl和齐墩果酸(OA)的双给药聚乙二醇水凝胶体系.该体系基于具有亲水和疏水性的聚乙二醇水凝胶,实现DOX·HCl和OA的共包封和共释放.两种药物的释放通过氧-迈克尔加成反应和醇修饰来调节.结果表明双给药水凝胶体系具有杀伤多药耐药型乳腺癌细胞株(MCF/MDR)的协同作用,有助于新型给药体系的设计和多药耐药型乳腺癌治疗的临床实践.     

三重PCR方法对猪、鸡源细菌中四环素类药物耐药基因的检测

针对GenBank上已公开的四环素类耐药基因tetA、tetC、tetM序列进行比对分析,设计特异性扩增引物,建立三重PCR法快速检测方法.结果表明,单重PCR和三重PCR的符合率为100%.应用本检测方法和传统药敏试验方法(药敏纸片法)对412猪、鸡源细菌的四环素耐药基因和表型同时进行检测.PCR检测实验结果显示,在412株待检细菌中,tetA、tetC、tetM的检出率分别为47.57%,38.35%和34.95%.药敏实验结果表明,待测细菌对四环素的耐药率最高,为95%;对多西环素的耐药率次之,为92%;对米诺环素耐药率相对最低,为84%.比较两种方法,发现其检出结果的符合率为88%.说明两种方法具有较高的一致性.本研究建立了一种猪、鸡源细菌四环素类药物耐药基因三重PCR检测方法,并进行了初步应用.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的临床感染分布及耐药性分析

目的-探讨医院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的临床感染分布及耐药情况,为临床抗感染治疗合理选择抗生素、减少耐药发生提供依据。方法：收集2010年8月-2011年12月从临床送检标本中分离的大肠埃希菌264株,药敏试验采用K～B纸片扩散法。根据美国临床检验室标准化委员会（CLSI）推荐的纸片扩散法,严格按照其制定的标准进行ESBLs确证实验。采用wHONET5．4软件进行统计学分析。结果：264株大肠埃希菌中检出134株（50．8％）产ESBLs大肠埃希菌,标本分布以痰标本最高（47．76％）,而科室分布以普外科最高（12．61％）。在药敏实验中,产ESBLs菌株对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮／舒巴坦、阿米卡星、哌拉西林／他唑巴坦、呋喃妥因、头孢西丁的耐药性较低（0％。15．5％）：环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素、复方新诺明,阿莫西林／克拉维酸的耐药性较高（41.3％～82．8％）;青霉素类、头孢菌素类及ATM耐药性高（100％）,临床不宜选用。结论：产ESBLs大肠埃希菌存在多重耐药性,临床实验室应加强产ESBLs菌株的监测,根据,临床药敏结果合理选用抗生素。     

首个甲型H1N1流感病毒耐药性分析基因芯片问世

由军事医学科学院放射与辐射医学研究所研制的甲型H1N1流感病毒耐药性分析基因芯片采用了具有自主知识产权的纳米标记信号放大技术,在准确检测到甲型H1N1流感病毒的同时,可对普通季节性毒株和新流行毒株进行甄别．并能准确检测病毒的耐药性突变位点,从而判断出病毒是否对达菲类药物产生耐药性。该芯片的灵敏度是传统方法的10倍以上．在获取样本后3～4h内即可完成检测过程。     

对抗细菌感染的新策略

细菌耐药性问题已经成为全球关注的热点问题。解决细菌耐药性问题需要多学科专家的共同努力。本书是由来自不同领域的国际一线专家撰写的一本内容丰富的专著,提供了包括细菌耐药性机制、开发新抗菌药物的方法和大量有活性的天然产物的资料。     

植物乳杆菌P-8对肠道菌群的调控及其机制

生物多样性是支撑地球生态系统稳定持续的重要条件.作为微观世界的主宰者,微生物是地球生态圈中既古老又具有极强的进化能力的庞大种群.地球微生态系统关乎于地球的生命繁荣,而人体的生态系统,作为这个庞大家族的一个分支,对人体的健康也至关重要.人们对肠道菌群的探索起步较早,尤其在近10年,研究呈现出爆发式的增长.在掀开肠道菌群这层神秘面纱之后发现,原来菌群与许多人体常见疾病都有着密切的关联,甚至是与肠道看似毫无联系的神经系统疾病都有着直接的影响.工业化的现代生活产生了一系列对于微生态系统破坏极强的因素,使得人体肠道生态系统遭到破坏,而如何修复肠道微生态系统,则是在肠道菌群研究中的最终要面对的问题.益生菌作为调节肠道菌群的直接途径,具备大量的科学数据的支撑,其特有的安全无副作用等特点,已得到广泛的认可.目前研究较多的益生菌主要归属于乳杆菌和双歧杆菌.Lactobacillus plantarumP-8(植物乳杆菌P-8)是目前研究与应用较为成熟的一株益生菌,通过对其全基因组进行分析,从遗传层面鉴定其具有较高的安全性,不含抗性基因等对人体有潜在威胁的基因.从其与人体肠道菌群的调控以及机制研究中发现,Lactobacillus plantarumP-8不仅在人体肠道中具有超过17周的定殖时间,同时还能够针对不同年龄人群肠道菌群特征进行有效的平衡与改善,并且具有较高的抑菌能力,具有替代抗生素的潜能,实用意义较大,且兼顾人类、动物、环境三者间的和谐共存.     

基于深度学习的抗菌药物耐药性分析研究

细菌耐药性的日益加剧,以及目前的耐药性检测方法周期长等问题,给临床第一时间准确用药带来极大的挑战和困境.为此,本文将探索深度学习技术在抗菌药物耐药性预测中的应用,提出一种融合注意力机制的双通道卷积神经网络模型,通过上下两个通道对建模后的送检数据做不同粒度的特征提取,每个通道经过卷积和池化后引入注意力机制,聚焦重要的特征信息,而后将两个通道的特征进行融合,从而完成分类输出.将模型在某三甲医院细菌药敏检测历史数据集上,与多种不同方法进行对比实验,结果表明,本文所提出方法在分类准确度F值指标中平均实现20.35％的提升,同时在小样本分类上表现出更好的效果.     

临床分离革兰阴性杆菌耐药与产AmpC酶的检测及其与耐药的关系分析

了解274株革兰阴性杆菌的耐药现状及产AmpC酶与耐药的关系分析。采用VITEK-32微生物分析仪鉴定274株革兰阴性杆菌菌种及K-B法进行其药物敏感性试验,并用酶粗提物头孢西丁三维实验检测AmpC酶。32株细菌产AmpC酶(占11.7%),其中阴沟杆菌13株(占30.2%)﹑产气肠杆菌2株(占22.2%)﹑不动杆菌6株(占21.4%)。274株菌对IPM﹑AK﹑CIP﹑FEP﹑CN﹑CAZ﹑ATM﹑CRO﹑PIP的药物敏感率从高到低依次为:89.4%﹑78.8%﹑69.3%﹑55.5%﹑45.9%﹑39.1%﹑36.9%﹑31.4%﹑30.3%﹑18.2%。革兰阴性杆菌的耐药状况严重,检测AmpC酶有助于临床抗菌药物的选用。