中国特有极度濒危植物猪血木RAPD反应体系的探索

采用改进的CTAB法提取中国特有极度濒危植物猪血木(Euryodendron excelsum H.T.Chang)嫩叶总DNA,进行RAPD分析。分别研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 和Taq DNA聚合酶用量对RAPD PCR扩增反应结果的影响。筛选并建立了适合于猪血木RAPD扩增的反应体系:总体积25μL,其中10×PCR缓冲液(500 mmol/L KCl,100 mmol/L Tris-HCl,1.0%Triton X-100,20 mmol/L MgCl2)2.0μL,引物(1.5μmol/L)0.2μL,dNTPs(10 mmol/L)0.3μL,模板2μL(15 ng),Taq酶0.4μL(0.5 U),水20.1μL。     

湖北八角莲属（小檗科）一新种

报道湖北省利川县小檗科八角莲属的一种新——利川八角莲     

DNA Extraction and RAPD Analysis of Podocarpus

以鸡毛松（Ｐ．ｉｍｂｒｉｃａｔｕｓ．）、竹柏（Ｐ．ｎａｇｉ）、长叶竹柏（Ｐ．ｆｌｅｕｒｙｉ）、百日青（Ｐ．ｎｅｒｉｆｏｌｉｕｓ）和罗汉松（Ｐ．ｍａｃｒｏｐｈｙｌｕｓ）为材料,通过对ＣＴＡＢ法进行改进提取了罗汉松属植物的ＤＮＡ．ＤＮＡ的产率和质量均较理想,能满足ＰＣＲ扩增的需要．对４组８０个引物进行筛选,发现９个引物的带型清晰并呈多态性,每个引物扩增的ＤＮＡ片段数为１～１１个．该９个引物在每个样本中扩增的片段总数平均为３１个．采用ＵＰＧＭＡ法对由ＲＡＰＤ数据求出的遗传距离进行聚类分析,得到的结果显示：本研究中的植物明显地分为３个亚类群,支持在罗汉松属内建立罗汉松组、竹柏组和鸡毛松组的处理方式;不同意把竹柏类从罗汉松属中分离出去成立新科的观点．     

南方红豆杉紫杉烷7β-羟基化酶基因全长序列的克隆和进化分析

 从南方红豆杉Taxus wallichiana var.mairei的新鲜嫩叶中提取基因组DNA作为模板,利用三组特异引物进行PCR扩增,然后克隆测序得到紫杉烷7β-羟基化酶的基因全长。该基因编码区起始密码子为ATG,终止密码子为TGA,全长1 692 bp;碱基组成为490 A (29.0%),351 C (20.7%),362 G (21.4%)和489 T (28.9%)。将紫杉烷7β-羟基化酶基因全长序列与细胞色素P450基因家族的其它三个成员进行比对,发现它与紫杉烷2α-羟基化酶基因、紫杉烷10β-羟基化酶基因及紫杉烷13α-羟基化酶基因的一致性分别为74%、68%及76%。它们的外显子和内含子的连接区均具保守的GT-AG结构,内含子区的变异性明显高于外显子区。进一步以红豆杉属的13个紫杉烷羟基化酶基因家族成员为对象,利用位点间可变ω(非同义替换率dN和同义替换率dS的比值) 模型对该基因家族的适应性进化进行分析。分支模型、位点模型以及分支－位点模型的分析表明：紫杉烷羟基化酶基因家族的少数分支处于正选择压力下(ω>1),但未检测到正选择位点;而绝大部分位点受强烈的负选择作用(ω<1)。     

极度濒危植物猪血木RAPD反应体系的优化

采用改进的CTAB法提取中国特有极度濒危植物猪血木(Euryodendron excelsum H.T.Chang) 嫩叶总DNA,并对其进行RAPD分析.分别检测了模板DNA、引物、dNTP、Mg2+和Taq DNA聚合酶用量对反应结果的影响.筛选并建立了适合于猪血木RAPD扩增的反应体系:总体积25 μL,其中10×PCR 缓冲液(500 mmol/L KCl,100 mmol/L Tris-HCl,110% Triton X-100,20 mmol/L MgCl2) 2.5 μL,引物( 1.5 μmol/L) 0.3 μL,dNTPs (10 mmol/L) 0.5 μL,模板2 μL (25 ng),Taq 酶0.2 μL (0.5 U).