SV40LT 基因过表达慢病毒载体的构建与包装

摘要: 目的构建SV40LT 基因过表达慢病毒载体,并对其进行慢病毒包装,为建立永生化的uncv 小鼠胚胎成纤维细胞奠定基础。方法从293T 细胞中获得SV40LT 基因,将其克隆到pLenti-GFP 质粒中,构建重组穿梭质粒pLenti-GFP-SV40LT,测序鉴定后分别将鉴定的阳性pLenti-GFP-SV40LT 和包装质粒pMD2. 0G 和psPAX2 共转染293T 细胞,包装产生慢病毒。结果SV40LT 基因过表达慢病毒载体的构建与包装成功。结论SV40LT 基因过表达慢病毒载体构建与包装的成功为uncv 小鼠胚胎成纤维细胞的永生化提供了工具。     

实验动物从业人员岗位证书管理现状分析

摘要: 我国实验动物科学已进入快速发展时期,得利于培养和造就了一支具有较高业务素质和专业技术水平的实 验动物人才队伍。实验动物从业人员岗位证书管理是实验动物工作规范化管理的重要组织部分,对于提高实验动 物从业人员素质、贯彻落实政策法规和推进实验动物标准化进程具有重要的意义。本文对近年来实验动物从业人 员岗位证书管理情况进行分析,为实验动物管理工作提供参考。     

原代小鼠卵巢上皮细胞TP53基因敲除及其生物学特征变化

目的 利用CRISPR/Cas9慢病毒载体系统建立小鼠原代卵巢上皮细胞TP53基因稳定敲除细胞系,分析细胞增殖、细胞周期、克隆形成以及细胞转移侵袭能力的变化。方法 构建LentiCRISPRv2-sgRNA TP53基因敲除质粒,用293FT细胞进行慢病毒包装,转导小鼠原代卵巢上皮细胞,嘌呤霉素筛选出稳定敲除细胞系,进行PCR、蛋白免疫印迹以及免疫荧光鉴定。细胞增殖、细胞周期变化、克隆形成、细胞迁移侵袭能力分别用MTT、流式细胞分析、单层培养以及Transwell小室进行测定。结果 TP53基因敲除小鼠原代卵巢上皮细胞中P53表达缺失;TP53敲除引起细胞迅速增殖,DNA合成加速,克隆形成以及迁移侵袭能力增强。结论 获得了原代小鼠卵巢上皮细胞TP53基因稳定敲除细胞系,细胞生物学特征明显改变。     

中国Btken-Ag cry1Ac杀虫毒素基因核心片段的克隆及核苷酸序列测定

用ＰＣＲ方法,将苏芸金芽孢杆菌肯尼亚亚种Ａｇ菌体（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｋｅｎｙａｅ Ａｇ,简称Ｂｔｋｅｎ－Ａｇ）编码ｃｒｙ１Ａｃ杀虫毒素蛋白的Ｎ末端（１．８４ｋｂ）的基因片段扩增后,淫ＥｃｏＲⅠ消化成三个不同大小的片段,将原扩增片段及酶切片段分别连接到ｐＣＲ－Ｓｃｒｉｐｔ克隆载体后转化进大肠杆菌,将每一克隆片段进行序列测定,在此基础上又设计出特异引物,再次以ｃｒｙ１Ａｃ的